товим методом, г/л.
Оформлення роботи. Розрахувати відсоткове і абсолютний вміст білкових фракцій у сироватці крові (для розрахунку в абсолютних одиницях можна використовувати дані вмісту білка в сироватці крові, отримані в роботі 8), а також альбумін/глобуліновий індекс і зробити висновок. p align="justify"> Практичне значення роботи. У нормі вміст білкових фракцій у сироватці крові наступне: альбуміни 35-60 г/л і глобуліни 25-35 г/л, з них ? 1 - глобуліни 2,5-5%, ? 2 - глобуліни 7-13%, ? - глобуліни 8-14% і ? - глобуліни 12-22%. В абсолютних одиницях концентрація ? 1 - глобулінів дорівнює 2,0-5,0, ? 2 - глобулінів 4,0-7,0, ? - глобулінів 5,0-9,0 і ? - глобулінів 8,0-17,0 г/л. Індекс альбуміни/глобуліни коливається від 1,5 до 2,3. При різних патологічних станах відбувається зміна протеінограмми. Гострий запальний процес характеризується зменшенням вмісту альбумінів і зростанням змісту ? - глобулінів, а в більш пізні терміни - збільшенням концентрації ? - глобулінів. Для хронічного запалення більш типово виражене підвищення рівня ? 2 і ? - глобулінів і помірне зниження альбумінів у сироватці крові; при злоякісних новоутвореннях різко знижується вміст альбумінів з одночасним суттєвим збільшенням всіх глобулінових фракцій. Ураження печінки (гепатити, цироз печінки) супроводжуються зниженням альбумінів, які утворюються в печінковій тканині, та відносним збільшенням ? - глобулінів.
Робота 56. Визначення активності катепсинов в сироватці крові по А.А. Покровському, А.І. Арчакова і О.Н. Любімцева
Реактиви. Ацетатний буфер, 0,1 М розчин з рН 4,0; гемоглобін, 4%-ний розчин на ацетатному буфері з рН 4,0 *; трихлороцтової кислота, 8%-ний розчин. p align="justify"> Обладнання. Штатив з пробірками; піпетки місткістю 1 і 5 мл, центрифуга з Центрифужна вагами; спектрофотометр. p align="justify"> Матеріал. Сироватка крові. p align="justify"> Метод заснований на спектрофотометричному визначенні при 280 нм кислоторозчинних продуктів гідролізу гемоглобіну, що утворюються під дією катепсинов сироватки крові.
Реакція протікає за рівнянням
Катепсин
Глобин ------- (n + 1) Фрагменти глобіну
+ nН2О
екстинкція кислоторозчинних продуктів гідролізу глобіну (пептиди, вільні амінокислоти) вимірюють при 280 нм на спектрофотометрі. У цій області спектра в основному поглинає тирозин і меншою мірою триптофан і фенілаланін. p align="justify"> Хід визначення. В дослідну пробірку вносять 1 мл розчину гемоглобіну і 0,5 мл сироватки крові, а в контрольну - ті ж речовини в тому ж обсязі і 2 мл розчину трихлороцтової кислоти. Проби перемішують струшуванням. p align="justify"> Ставлять пробірки на 60 хв у водяну баню при 37 Вє С, після цього доливають до дослідної пробі 2 мл розчину трихлороцтової кислоти і перемішують вміст струшуванням. Центрифугують проби 10 хв при 3000 об/хв, надосадову рідину зливають у чисті пробірки. p align="justify"> Вимірюють екстинкцію дослідної проби проти контрольної на спектрофотометрі при 280 нм в кюветі з товщиною шару 1 см.
Розрахунок. Проводять з використанням калібрувального графіка на тирозин або молярного коефіцієнта екстинкції тирозину:
Е5000
х = ------,
0,436
де х - активність катепсинов, ммоль тирозину/(год? л);
Е - екстинкція дослідної проби проти контрольної;
- коефіцієнт перерахунку на 1 л сироватки крові;
, 436 - коефіцієнт екстинкції 1 ммоля тирозину.
Оформлення роботи. За екстинкції розрахувати активність катепсинов в сироватці крові, зробити висновок і відзначити практичне значення визначення даного ферменту. p align="justify"> Практичне значення роботи. Катепсини, гидролизующие білки у кислому зоні рН, специфічні для лізосом тканин, тому в наукових дослідженнях їх визначають як індикатори чистоти лізосомальної фракції. При ураженні органів...
