9;єм сечі, мл;
- коефіцієнт перерахунку мікрограмів в міліграмів.
Практичне значення роботи. Гідроксипролін входить до складу лише білків сполучної тканини - колагену і еластину, в яких вміст даної амінокислоти становить відповідно 10-15 і 1,5%. Виділення гідроксипроліну з сечею, а також концентрація його в плазмі або сироватці крові залежить, в основному, від швидкості синтезу колагену, освіти колагенових фібрил та інтенсивності розпаду колагену в тканинах. p align="justify"> У нормі екскреція вільного гідроксипроліну з сечею у дорослої людини становить 1-8 мг, або 7,6-61,0 мкмоль на добу. Підвищене виділення його з сечею відзначається при пошкодженні сполучної тканини, що супроводжується розпадом колагену (наприклад, при ревматизмі, системної склеродермії, ураженні кісток та ін.) Динамічне спостереження за екскрецією гідроксипроліну з сечею може дати інформацію про формування рубця в постінфарктний вогнищі міокарда. br/>
ОБМІН АЗОТОВМІСНИХ небілкових речовини
Основну частину азотовмісних небілкових сполук складають нуклеїнові кислоти, нуклеотиди, порфіріни і ряд інших речовин, які утворюються в процесі їх обміну. У широкому сенсі до азотсодержащим небілковим компонентів відносять пептиди, амінокислоти і деякі продукти обміну останніх. Однак дослідження пептидів і амінокислот більш інформативно для стану білково-амінокислотного обміну, а деякі продукти їх метаболізму, що визначаються в клініці (так званий залишковий азот, сечовина та ін), характеризують в цілому стан азотистого обміну. ​​br/>
1. Дослідження загальних продуктів азотистого обміну
Деякі продукти обміну азотистих сполук є спільними як для білкових, так і небілкових речовин. У клініко-біохімічних лабораторіях з метою діагностики порушень обміну азотовмісних сполук найчастіше визначають такі показники, як залишковий азот, сечовину, аміак. Залишковий азот - це азот небілкових сполук, що залишаються в екстракті після повного осадження білків крові. До складу залишкового азоту входить азот сечовини, пептидів, амінокислот, аміаку, креатину, креатиніну індікана, білірубіну та інших азотовмісних низькомолекулярнихречовин. br/>
Робота 60. Кількісне визначення залишкового азоту в крові фотоколориметричним методом
Реактиви. Реактив Несслера *; трихлороцтової кислота, 10%-ний розчин; сірчана кислота, конц.; Пероксид водню, 30%-ний розчин; гідроксид натрію, 0,4 М розчин. p align="justify"> Обладнання. Штатив із пробірками; піпетки місткістю 1, 5 і 10 мл; очні піпетки; центрифуга з Центрифужна вагами; піщана лазня; ФЕК. p align="justify"> Матеріал. Кров, взята з пальця. p align="justify"> Метод заснований на здатності аміаку, який утворюється в результаті мінералізації безбілкових азотовмісних сполук крові, давати з реактивом Несслера з'єднання жовтого кольору, інтенсивність якого пропорційна концентрації залишкового азоту.
Хід визначення. У центрифужну пробірку наливають 0,5 мл дистильованої води, беруть з пальця обстежуваного мікропіпеткою 0,2 мл крові і вносять її в пробірку, кілька разів промиваючи мікропіпетку вмістом. p align="justify"> У пробу додають 1,3 мл розчину трихлороцтової кислоти, вміст перемішують скляною паличкою і залишають осідати білки протягом 20 хв, потім центрифугують 10 хв при 3000 об/хв і зливають в чисту пробірку надосадову рідину.
Відбирають 1 мл безбілкового центрифугата в іншу пробірку, доливають до нього 3 краплі концентрованої сірчаної кислоти і 2 краплі розчину пероксиду водню. Ставлять пробірки приблизно на 30 хв у піщану баню для мінералізації вмісту (до повного просвітлення розчину). p align="justify"> Після охолодження пробірки до кімнатної температури в неї вносять 10 мл дистильованої води, ретельно знімають зі стінок мінералізат скляною паличкою і перемішують.
Доливають в пробірку по 0,5 мл розчину гідроксиду натрію і реактиву Несслера. Після появи жовтого забарвлення фотометрують дослідну пробу проти контрольної (10 мл дистильованої води і 0,5 мл реактиву Несслера) на ФЕК при 610-650 нм (червоний світлофільтр) у кюветі з товщиною шару 2 см.
Розрахунок роблять за формулою
m2? 5000
х = -----,
1? 1000
де х - концентрація залишкового азоту в крові, г/л; - вміст азоту в пробі, знайдена за калібрувальним графіком (рис.10), мг;
- коефіцієнт перерахунку на 1 л крові;
- обсяг оцтового екстракту, мл;
- обсяг безбілкового центрифугата, взятого на аналіз, мл.
х = m10.
Після спрощення формула набуває наступний вигляд:
В
Оформлення роботи. За екстинкції розрахувати вм...
