іст азоту в крові, порівняти його з нормою і зробити висновок про можливі відхилення. p> Практичне значення роботи. За норму приймається вміст залишкового азоту в крові в межах 0,2-0,4 г/л. Підвищення залишкового азоту в крові - азотемія - буває абсолютна і відносна. Абсолютна викликається затримкою азотистих шлаків або підвищеному освітою їх в організмі; відносна спостерігається при зневодненні організму (нестримне блювання, посилене потовиділення та ін.) p> Розрізняють ниркову і позанирковим азотемию. Перша спостерігається при порушенні видільної здатності нирок (гострі та хронічні нефрити), причому ступінь азотемії відповідає тяжкості патологічного процесу. Позанирковим є наслідком підвищеного розпаду білків в організмі при гарячкових станах, опіках, діабеті, важких ураженнях печінки і т.д.
Робота 61. Кількісне визначення сечовини в сироватці крові та сечі
Реактиви. Кольоровий реактив *; сечовина, стандартний розчин 1г/л, або 16,65 ммоль/л; набір В«УреатестВ». p align="justify"> Обладнання. Штатив із пробірками; піпетки місткістю 0,1, 2 і 5 мл; алюмінієва фольга; водяна баня; ФЕК. p align="justify"> Матеріал.
Сироватка крові.
Сеча, зібрана за добу, профільтрована і розлучена перед аналізом водою в 25 разів.
а. Визначення вмісту сечовини в сироватці крові. Метод заснований на здатності сечовини у присутності тіосемікарбазіда і солей заліза в сильнокислой середовищі утворювати з діацетілмонооксімом сполука червоного кольору, інтенсивність забарвлення якого пропорційна вмісту сечовини в досліджуваній рідині. p align="justify"> Хід визначення. В дослідну пробірку відмірюють 0,1 мл розведеної в 10 разів сироватки крові, в стандартну - такий же обсяг стандартного розчину сечовини і в контрольну - 0,1 мл дистильованої води. Додають в усі пробірки по 2 мл кольорового реактиву і ретельно перемішують їх вміст струшуванням. p align="justify"> Всі пробірки закривають кришечкою з алюмінієвої фольги і нагрівають у киплячій водяній бані протягом 10 хв (точно!). Потім охолоджують їх під струменем холодної води. p align="justify"> Вимірюють екстинкцію стандартної і дослідної проб проти контрольної на ФЕК при 540-560 нм (світлофільтр зелений) в кюветі з товщиною шару 0,5 см.
Примітка. Забарвлення нестійка, тому вимірювання необхідно провести протягом 15 хв. p align="justify"> Розрахунок. Вміст сечовини х (ммоль/л) в сироватці крові розраховують за формулою
Еоп16, 65? 10
х = -----,
Їсть
де Еоп - екстинкція дослідної проби проти контрольної;
Їсть - екстинкція стандартної проби проти контрольної;
, 65 - концентрація сечовини в стандартній пробі, ммоль;
Азот сечовини (в ммоль/л) розраховують, розділивши отримане значення вмісту сечовини в сироватці на 2,14 (число, що виражає відношення молекулярної маси азоту сечовини до маси всієї молекули сечовини).
б. Визначення вмісту сечовини в сечі. Принцип методу той же, що й у попередній роботі. p align="justify"> Хід визначення. Для аналізу використовують 0,1 мл розведеної сечі і 0,1 мл стандартного розчину сечовини і обробляють ці проби так само, як і сироватку крові. p align="justify"> Розрахунок проводять за формулою
ЕопV25? 1,665
х = -----,
Ест0, 1? 1000
де х - кількість сечовини, ммоль/добу; - обсяг добової сечі;
, 665 - вміст сечовини в 0,1 мл стандартної проби, мкмоль;
Еоп - екстинкція досвіду;
Їсть - екстинкція стандарту;
, 1 - об'єм сечі, взятий на дослідження, мл;
- коефіцієнт перерахунку мкмоль в ммоль.
в. Визначення вмісту сечовини в сироватці крові експрес-методом за допомогою набору В«УреатестВ». Метод заснований на здатності уреази розкладати сечовину з утворенням аміаку, який забарвлює смужку реактивної хроматографічного паперу в блакитний колір. Висота забарвленої зони пропорційна концентрації сечовини, яку розраховують за калібрувальним графіком. p align="justify"> Хід визначення. Сироватку крові розводять водою у відношенні 1:1. На просочений ферментом кінець паперової смужки в 3 мм від червоної парафінової смуги наносять спеціальною піпеткою 0,03 мл розведеної сироватки крові. Смужку негайно поміщають в чисту суху пробірку, герметично закривають її корком і ставлять у термостат при 37? С. Через 20 хвилин смужку витягають, вимірюють висоту пофарбованої в блакитний колір зони. p align="justify"> Розрахунок. За калібрувальним графіком, що входить в набір В«УреатестВ», знаходять ...
