іаніду, що утворюються при нітропруссідний терапії, в культивованих клітинах ссавців, дрозофіли Melanogaster, і мишей. Як показано вище кобінамід пов'язує NO, але при концентраціях в 2,5-5 рази більше і менш міцно, ніж нітропрусид, тому він не зменшує концентрацію NO і фізіологічну ефективність нитропруссида, а лише зв'язує ціанід [40]. Проте зазначено, що кобінамід, в якому валентність кобальту дорівнює II, не здатний зв'язувати ціанід.
Головним мінусом в нітропруссідний терапії є токсичність ціанідів. Тому важливим відкриттям є використання замість нитропруссида нітрозілкобінаміда.
Нітрозілкобінамід (NO-Cbi), синтезований з кобінаміда, є дуже корисним NO - донором. Часто в медицині обмежена кількість NO - генеруючих препаратів використовують в якості додаткового методу лікування гострих хронічних захворювань. Оксид азоту проявляє кілька фізіологічних ефектів, насамперед сприяючи розслабленню гладком'язових клітин судин у венозній і артеріальних системах, тобто володіє сильним судинорозширювальну ефектом. Головний недолік його клінічного використання - це те, що NO є газом. Тому його вводили у вигляді органічних нітратів (нітрогліцерин, динітрат ізосорбіду, пентаерітрітолтетранітрат), які вимагають біотрансформації в активну форму, для того, щоб генерувати NO. У зв'язку з цим важливо відзначити, що нітрозілкобінамід є ефективним прямим NO - генеруючим агентом. NO-Cbi має ряд важливих особливостей. По-перше, його легко синтезувати з Cbi (III), який легко отримати з комерційно доступного гідроксокобаламіна. По-друге, NO-Cbi стабільний у водному розчині. По-третє, продуктом розпаду NO-Cbi є Cbi (II), який у фізіологічних умовах окислюється до Cbi (III), який відносно нетоксичний, принаймні, в дозах необхідних для лікування серцевої недостатності.
Таким чином, дослідження, наведені в статті [42], показують, що NO-Cbi є корисним донором NO, який може бути використаний в лабораторних умовах, і крім того, може бути розроблений судинорозширювальний препарат для лікування гіпертонії і, можливо, інших захворювань, таких як стенокардія і серцева недостатність.
В роботі [43] вивчалася реакція NO з глютатіонілкобаламіном. Було доведено, що дана взаємодія протікає за механізмом радикального заміщення (1.5).
Cbl (III) -NO в даній реакції може бути отриманий за допомогою різних механізмів заміщення лігандів:
) діссоціатівний. Спочатку відбувається утворення Cbl (II) і радикала глютатіоніна (GS?), Далі відбувається утворення комплексу NO-Cbl (II).
) асоціативний. Реакція протікає зі збільшенням координаційного числа.
) внутрішньомолекулярний, який може протікати як по Диссоціативна, так і по асоціативному механізму.
У даній роботі було доведено, що реакція NO з глутатіонілкобаламіном протікає по внутрішньомолекулярними механізму (рис. 1.8).
Рис.1.8. Схема взаємодії NO з глутатіонілкобаламіном
2. Експериментальна частина
. 1 Використовувані реактиви
В якості об'єктів дослідження в роботі обрані:
· Діаквакобінамід (надано проф. Дж.Боссом, Університет Сан-Дієго, США)
· нітрит натрію, х.ч.
· фруктоза, х.ч.
· гідроксид натрію, х.ч.
· карбонат натрію, х.ч.
Для приготування розчинів використовувалася дистильована вода. Вільні від кисню розчини отримували шляхом пропускання через них аргону.
. 2 Реакція Cbi (III) з фруктозою
Взаємодія кобінаміда з фруктозою було вивчено в широкому діапазоні рН. Попередніми експериментами встановлено, що при рН нижче 10,4 реакція Cbi (III) c фруктозою не протікає.
При додаванні до Cbi (III) розчину фруктози в лужному середовищі (pH 10,4 - 12) спостерігалася зміна кольору розчину з червоного на жовтий. При цьому в початковий момент часу спостерігалося різке падіння піку при 530 нм (рис. 2.1). Подальші зміни спектра відбувалися повільніше, спостерігалося зростання максимумів поглинання при 315 нм і 469 нм, а також падіння піків при 340 нм, 500 нм. Є ізобестіческіе точки при 262 нм, 330 нм, 370 нм, 487 нм, 573 нм. Кінцевий спектр указной реакції повністю ідентичний такому у випадку Cbi (II), отриманого за допомогою аскорбінової кислоти.
Рис. 2.1. Спектральні зміни при відновленні Cbi (III) фруктозою в лужному середовищі; [фруктоза]=0,1 моль/л; [Cbi]=4,3? 10 - 5 моль/л; рН=11,4; 25 0 C.
При додаванні до Cbi (III) розчину фруктози в сильно лужному середовищі (рН=12,3) спостерігалося два послідовні зміни кольору розчину: на першому етапі - з червоного на жовтий; на другому - з жовтого на коричневий.
На першому етапі спостеріга...
