ня
?
Дослідження на ФОС:
1) попередні,
2) підтверджують,
) кількісне визначення.
Характеристика деяких методів ізолювання
ПрепаратОб'ектРастворі-тельрНКратностьОчисткаРастворение сухого залишку Метафосоргани кровьгексан (1:2) СНCl 3 (1:1) гексан2-31-2 год + 1 год 4ч +2 год +2 ч1 ) б у Na 2 SO 4 2) висушування до V = 20мл 3) екстракція ДМФА 4) ТСХ1) гексан 2) ацетонХлорофосоргани кровьвода + Н 2 < span align = "justify"> SO 4 з екстракцією СНCl 3 ефір, CHCl 3 2-32ч + 1ч +1 ч1) б в Na 2 SO 4 2) висушування на водяній банеацетонКарбофос органи кров рослинне сирьебензол CHCl 3 CCl 4 1,01 год х 51) фільтрування через б в Na 2 SO 4 2) висушування при 60 0 З 3) з загнив-додатково очищення на Al 2 O < span align = "justify"> 3 10 мл етанолу
Примітки:
Об'єкт без глибокого гнильного розкладу - 1 - 3 дні зберігання. p align="justify"> Кількість досліджуваного біоматеріалу: для ізолювання метафосу - 25 гр., для ізолювання хлорофосу і карбофосу - 20 - 100 гр.
При дослідженні крові її беруть з вени або артерії, додають гепарин, а потім досліджують.
Реакцію середовища створюють сірчаної або соляної кислотою.
Докази наявності ФОС
. Попередні дослідження. p align="justify"> .1. Попередня проба - холінестеразная. p align="justify"> Носить негативне судово-хімічне значення.
Проба виконується в трьох чашках Петрі, заповнених агар - агаром.
Перша - В«холостий досвідВ». Містить агар-агар, в лунку якого внесена крапля ацетилхоліну, крапля сироватки, що містить ацетил-холіноестеразу і крапля індикатора бромтимолового синього. p align="justify"> Друга чашка - стандартна. Містить ті ж компоненти, що і перша, але і краплю стандартної речовини - ФОС. p align="justify"> У третю чашку Петрі з агар-агаром вносять компоненти, як і в першу, але додають краплю досліджуваного екстракту.
Після термостатування колір індикатора змінюється в чашках, де немає ФОС від синього до жовтого. p align="justify"> У другій чашці, де був стандарт і в третій, якщо в досліджуваному екстракті був ФОС колір індикатора залишається синім, так як ФОС блокує холіноестеразу, ацетилхолін не розкладається і рН середовища не змінюється.
Схема холінестеразной проби:
) АХ + АХЕ + ІНД (синій)? Холін + CH 3 COOH + ІНД (жовтий)
) АХ + АХЕ + ФОС + ІНД (синій)? АХ + ІНД (синій)
4) АХ + АХЕ + ЕКСТРАКТ + ІНД (синій)? АХ + ІНД
(колір по наявності ФОС в екстракті)
Термостатування при 38 0 - 40 0 З 30 хвилин.
Використовуваний індикатор - бромфеноловий синій. p align="justify"> Принцип:
Ацетилхолін при ензиматичну розщепленні ацетилхолінестеразою, що знаходиться в сироватці, утворює холін і оцтову кислоту. Утвориться CH 3 COOH змінює реакцію середовища на кислу і веде до зміни кольору індикатора.
ФОС з досліджуваного екстракту дифундує в шар агар - агару, інгібує фермент, ацетилхолін не розщеплюється, реакція середовища не змінюється, колір індикатора також не змінюється.
Ме...
