іввідношення реактивів в пробірках
Назва раствораНомер пробіркі12345678910Ацетатний буфер МЛ5, 455,405,355,305,255,205,155,105,055,00 Стандартний р-р мл0, 050,100,150,200,250,300,350,400,450,50 Молібдат амонію мл0, 5Аскорбіновая к-та мл0, 5Общій обсяг МЛ6, 5
Таблиця 2
Молібденова-синя шкала забарвлення
ПоказательНомер пробіркі12345678910Стандартний р-р мл0, 050,100,150,200,250,300,350,400,450,50 С (КН 2 РВ 4 ) 10 -3 мг/мл0, 1920 , 3850,5770,7690,9621,1541,3461,5381,7311,932 Оптична щільність Е 660нм 0,130,150,170,190,210,230,250,270,290,31
В
Рис. 22. Калібрувальна крива для визначення Р 2 Про 5
Вміст фосфору (мг/100 г) обчислюють за формулою:
;
де С - концентрація фосфору, знайдена за калібрувальною кривою, мг/мл;
V - загальний об'єм проби, мл;
V 1 - обсяг проби, взятої для визначення фосфору мл;
V 2 - кінцевий обсяг перед колориметрирування (10 мл);
н - маса наважки, м.
.2.2 Визначення активності фосфорилази (КФ 2.4.1.1)
фосфорілаза каталізує перетворення крохмалю в глюкозо-1-фосфат у присутності неорганічного фосфату:
В
Ця реакція оборотна. Однак фосфорілаза синтезує крохмаль з глюкозо-1-фосфату тільки при наявності в реакційній суміші слідів крохмалю в якості В«затравкиВ». Концентрація водневих іонів впливає на рівновагу реакції. Принцип методу заснований на визначенні змін у змісті неорганічного фосфору або крохмалю в реакційній суміші під дією фосфорилази. p align="justify"> Реактиви:
) реактив А (27,15 мл 0,1 М фосфатного буфера з рН 7,2 + 72,40 мл 0,9%-го розчину NaCl + 0,45 мл 0,8%-го розчину MgS0 < span align = "justify"> 4 );
) 3%-й розчин крохмалю;
) 0,1 М розчин фтористого натрію;
) 10%-й розчин трихлороцтової кислоти (Тху).
Приготування реактивів:
. Для отримання 0,1 М фосфатного буфера з рН 7,2, змішали 17,7 мл 0,1 М КН 2 РВ 4
