х кількостях. Поява креатину в сечі дорослої людини пов'язане з порушенням обміну креатину і найбільш часто зустрічається при ураженні м'язової тканини (м'язова дистрофія, м'язова атрофія, міастенія, міозит, миотония), Е-авітамінозі, при тонічних судомах, посиленому розпаді тканинних білків. При цьому вміст креатиніну в сечі знижується. br/>
2. Вивчення обміну нуклеїнових кислот і нуклеотидів
Розпад нуклеїнових кислот та їх мономерів до кінцевих продуктів можна висловити такою схемою:
Нуклеїнові? Нуклеотиди? Пурини,? Сечова кислота, кислоти піримідинів ? - аланін і аміак
Про стан нуклеїнового і нуклеотидного обміну судять по активності ферментів, що беруть участь на різних стадіях їх розпаду і перетворення, а також з утримання сечової кислоти - кінцевого продукту обміну пуринових підстав.
Робота 63. Визначення активності кислої дезоксирибонуклеази (ДНКази) у сироватці крові за А.А. Покровському, А.І. Арчакова і О.Н. Любімцева
Реактиви. ДНК, 1 г/л розчин в ацетатному буфері, 0,1 М з рН 5,0; хлорне кислота, 0,5 М розчин. p align="justify"> Обладнання. Штатив із пробірками; піпетки місткістю 1 і 2 мл; термостат, відрегульований на 37? С; холодильник; центрифуга з Центрифужна вагами; годинник; спектрофотометр. p align="justify"> Матеріал. Сироватка крові. p align="justify"> Метод заснований на спектрофотометричному вимірі при 260 нм кислоторозчинних продуктів гідролізу ДНК, що утворюються під дією ДНКази, що міститься в досліджуваному матеріалі:
ДНК, ДНКаза
високополімерних ---- (n + 1) фрагментів ДНК
+ nН2О
Хід визначення. У дослідну і контрольну пробірки відмірюють по 1,2 мл розчину ДНК. Потім в дослідну пробу додають 0,2 мл сироватки крові і перемішують вміст струшуванням. p align="justify"> Поміщають обидві проби на 30 хв у термостат при 37 Вє С, після чого в контрольну пробірку доливають 1,6 мл хлорної кислоти і 0,2 мл сироватки крові, а в дослідну - такий же обсяг хлорної кислоти . Вміст проб перемішують. p align="justify"> Ставлять пробірки на 30 хв у холодильник при 4 Вє С, а потім обидві проби центрифугують 10 хв при 3000 об/хв (для осадження негідролізовані ДНК). Надосадову рідину зливають у чисті пробірки і вимірюють екстинкцію дослідної проби проти контрольної на спектрофотометрі при 260 нм в кюветі з товщиною шару 1 см.
Розрахунок проводять за формулою
х = Е2602? 500,
де х - активність ДНКази в Е260/г? л;
- коефіцієнт перерахунку на 1 годину;
- коефіцієнт перерахунку на 1 л сироватки крові;
Оформлення роботи. Розрахувати активність ферменту в досліджуваному матеріалі, зробити висновок про присутність кислої ДНКази в сироватці крові і практичному значенні роботи. p align="justify"> Практичне значення роботи. Кисла ДНКаза зосереджена в лізосомах клітин різних тканин, тому в наукових дослідженнях визначення цього ензиму використовують для контролю чистоти виділеної фракції лізосом. Крім того, кисла ДНКаза є індикатором пошкодження або підвищеної проникності мембран лізосом, що має практичне значення при оцінці дії лізосомотропних препаратів і патологічного процесу. p align="justify"> Робота 64. Визначення вмісту сечової кислоти в сироватці крові за методом Мюллера і Зейферта
Реактиви. Реактив Фоліна *; трихлороцтової кислота, 20%-ний розчин; карбонат натрію, насичений розчин; сечова кислота, стандартний розчин 0,02 мг/мл, свіжоприготований. p align="justify"> Обладнання. Штатив із пробірками; піпетки місткістю 1 і 2 мл; центрифуга з Центрифужна вагами; ФЕК. p align="justify"> Матеріал. Сироватка крові. p align="justify"> Метод заснований на здатності сечової кислоти відновлювати фосфорновольфрамовий реактив (реактив Фоліна) з утворенням сполук, інтенсивність забарвлення яких пропорційна концентрації даної кислоти.
Хід визначення. У центрифужну пробірку вносять по 1,5 мл сироватки крові, дистильованої води і трихлороцтової кислоти. Вміст пробірки перемішують, через 5 хв центрифугують протягом 10 хв при 3000 об/хв. p align="justify"> Беруть дві чисті градуйовані пробірки: дослідну і стандартну; додають в них реактиви згідно з таблицею.
РеактивОпытСтандартЦентрифугат, відповідний 0,5 мл сивороткі1, 5 мл-Стандартний розчин сечової кислоти-0, 5 млТріхлоруксусная кислота-0, 5 млДістіллірованная вода-0, 5 млНасищенний розчин карбонату натрія0, 7 мл0, 7 млРеактів Фоліна (обережно!) 1 капля1 крапля
Через 10 хв обидві проби фотометрують проти води на ФЕК при 510-560 нм (зелен...
