ий світлофільтр) в кюветі з товщиною шару 0,5 см.
Розрахунок проводять за формулою
Еоп0, 01? 2000
х = -----,
Ест168
де х - вміст сечової кислоти в сироватці крові, ммоль/л;
Еоп - екстинкція дослідної проби;
Їсть - екстинкція стандартної проби;
, 01 - маса сечової кислоти в пробі стандартного розчину, взятого для реакції, мг;
- коефіцієнт перерахунку на 1 л сироватки крові;
- молекулярна маса сечової кислоти.
Оформлення роботи. Розрахувати вміст сечової кислоти в сироватці крові і зробити висновок про можливі зміни пуринового обміну. ​​p align="justify"> Практичне значення роботи. У нормі вміст сечової кислоти в сироватці крові становить 0,10-0,40 ммоль/л, а з сечею виділяється 2,36-5,9 ммоль на добу. Підвищений вміст сечової кислоти спостерігається в крові та сечі при багатьох патологічних станах, пов'язаних з посиленим розпадом нуклеопротеїдів (лейкозах, діабеті, алергії та ін.) Різко збільшується концентрація сечової кислоти при подагрі, це супроводжується відкладенням солей сечової кислоти в суглобах і різних тканинах організму. Пониження вмісту сечової кислоти в сироватці крові відзначається при анемії, після прийому піперазину, атофану, саліцилатів та кортикотропіну (АКТГ). br/>
3. Дослідження порфіринового (пігментного) обміну
Для оцінки стану порфіринового обміну використовують визначення пігменту білірубіну, що є продуктом розпаду гемпротеідов. Існують два типи білірубіну: некон'югований (вільний, який з діазореактивом дає непряму реакцію, тобто після розчинення в етанолі) і кон'югований (пов'язаний з глюкуроновою кислотою, який відразу реагує з діазореактивом). За співвідношенням фракцій білірубіну судять про зміну пігментного обміну. ​​br/>
Робота 65. Визначення білірубіну та його фракцій в сироватці крові по Йендрашіку, Клеггорну і Грофу
Реактиви. Кофеїновий реактив *; хлорид натрію, 9 г/л розчин; діазореактів *. p align="justify"> Обладнання. Штатив із пробірками; піпетки місткістю 1 і 2 мл; ФЕК. p align="justify"> Матеріал. Сироватка крові. p align="justify"> Метод заснований на здатності пов'язаної і диссоциированной форми вільного білірубіну давати при взаємодії з діазофенілсульфоновой кислотою азобілірубін рожево-фіолетового кольору. Вільний білірубін перекладається в розчинний диссоциированное стан Кофеїнова реактивом, завдяки чому в цій пробі визначається загальний білірубін. За різницею між загальним і пов'язаним білірубіном знаходять концентрацію вільного білірубіну. p align="justify"> Хід визначення. У три пробірки вносять згідно з таблицею необхідні інгредієнти і ретельно перемішують. br/>
РеактівиОбщій білірубін, млСвязанний білірубін, млКонтроль, млСиворотка0, 500,500,50 Кофеїновий реактів1 ,75-1, 75Раствор хлориду натрію-1, 750,25 Діазореактів0, 250,25 -
При визначенні загального білірубіну проби лишають стояти на 20 хв для розвитку забарвлення, а пов'язаного - на 5-10 хв (при тривалому стоянні в реакцію вступає вільний білірубін).
В
Після закінчення зазначеного часу фотометрують кожну пробу проти води на ФЕК при 520-560 нм (зелений світлофільтр) в кюветі з товщиною шару 0,5 см.
Розрахунок. З отриманих екстинкції загального та зв'язаного білірубіну віднімають екстинкцію контрольної проби (контроль на мутність сироватки) і знаходять по них вміст загального та зв'язаного білірубіну (в мкмоль/л) за калібрувальним графіком (рис. 11). Вільний (некон'югований) білірубін розраховують за різницею між величинами загального та зв'язаного білірубіну. p> Оформлення роботи. Розрахувати вміст загального білірубіну та його фракцій в сироватці крові і зробити висновок про причину можливих відхилень цих показників в досліджуваному матеріалі. p> Практичне значення роботи. У нормі концентрація загального білірубіну в сироватці крові становить 8,0-20,0 мкмоль/л; з цієї кількості 75% припадає на частку некон'югірованного (вільного) білірубіну (6,0-15,0 мкмоль/л) і 25% - на частку кон'югованого (зв'язаного) білірубіну (2,0-5,0 мкмоль/л). Дослідження вмісту білірубіну проводиться в клініці для диференціальної діагностики жовтяниць. Жовтянична забарвлення шкірних покривів проявляється при рівні білірубіну в крові вище 27 мкмоль/л. При надпечінкову желтухах (гемолітичні анемії, жовтяниця новонароджених та ін) збільшується вміст вільного білірубіну в крові, при печінкових желтухах, що виникають внаслідок ураження власне клітин печінки, підвищується концентрація зв'язаного білірубіну в крові, а при підпечінковій желтухах, до яких відноситься механічна, спостерігається зро...
