стання рівня як вільного, так і, більшою мірою, пов'язаного білірубіну.
МОЛЕКУЛЯРНА ПАТОЛОГІЯ
Біохімічні дослідження з метою виявлення молекулярних хвороб надзвичайно важливі в педіатрії, оскільки своєчасна діагностика їх допомагає раннього лікування з більш сприятливим результатом. При ферментопатії блокується ланцюг біохімічних перетворень в тканинах, тому ранньою ознакою такого захворювання є накопичення в крові і підвищене виділення з сечею речовин, службовців субстратом для пошкодженого ферментного білка. У той же час концентрація продуктів даної ферментативної реакції в біологічних рідинах знижена. Тому спочатку в хворих з підозрою на молекулярну патологію ставлять якісну реакцію на речовини, накопичення яких очікують. При позитивних пробах проводять їх кількісне визначення. Для уточнення ензимопатії досліджується якісно і кількісно відповідний фермент в сироватці і клітинах крові, а також у біоптатах. br/>
1. Експрес-діагностика патології амінокислотного обміну
Робота 66. Виявлення гіпераміноацідуріі
Реактиви. Нінгідрин, 0,5%-ний розчин в ацетоні з додаванням 1 мл концентрованої оцтової кислоти на 100 мл рідини; гліцин, стандартний 20 мМ розчин. p align="justify"> Обладнання. Смужки фільтрувального паперу 10х40 мм; сушильну шафу, відрегульований на 60? С; очні піпетки. p align="justify"> Матеріал. Сеча, нормальна і патологічна *. p align="justify"> Принцип методу див. роботу 1, б.
Хід визначення. У трьох пробірках готують серію розведень стандартного розчину гліцину у 2,5 і 10 разів, при цьому концентрація азоту гліцину у пробах становить відповідно 10,4 і 2 ммоль/л. p align="justify"> На дві смужки фільтрувального паперу наносять по 1 краплі відповідно нормальної і патологічної сечі, а ще на чотири - по 1 краплі нерозведеного і розведеного в 2,5 і 10 разів стандартного розчину гліцину. Плями підсушують на повітрі. p align="justify"> На висушені плями наносять по 1-2 краплі розчину нингидрина, підсушують на повітрі і потім поміщають смужки на 15 хв у сушильну шафу при 60 Вє С, підвішуючи їх на гачках.
Порівнюють інтенсивність забарвлення проб нормальної і патологічної сечі з забарвленням гліцину на смужках фільтрувального паперу. Кольорова шкала відповідає наступним концентраціям гліцину: 20. 10, 4, 2 ммоль/л. p align="justify"> Оформлення роботи. Оцінити приблизний зміст азоту амінокислот в нормальній і патологічній сечі. Зробити висновок про наявність гіпераміноацідуріі у хворої дитини і вказати можливі її причини. p align="justify"> Практичне значення роботи. У нормі екскреція азоту амінокислот становить 0,29-5,35 ммоль/добу. У дитини його виділяється 0,07-0,15 ммоль/кг маси тіла на добу, причому 2/3-3/4 цієї кількості екскретується в нічний час. Гіпераміноацідурія спостерігається при молекулярних хворобах, що виникають внаслідок дефекту білків епітелію канальців нирок, що переносять амінокислоти і сприяють їх реабсорбції, або в результаті порушення обміну амінокислот у тканинах. Остаточно спадкова причина гіпераміноацідуріі встановлюється після виключення ряду захворювань (цироз печінки, гепатити, дистрофія, рахіт і т.д.), теж призводять до підвищеного виділення амінокислот з сечею. br/>
Робота 67. Експрес-методи діагностики фенілкетонурії
Фенілкетонурія, або фенілпіровиноградна олігофренія, пов'язана з дефектом ферменту фенілаланінгідроксилази, внаслідок чого порушується перетворення фенілаланіну в тирозин. При цьому збільшується вміст фенілаланіну і продуктів її обміну (зокрема, фенілпіровіноградной кислоти) в крові та сечі. p align="justify"> Реактиви. Фенілаланін, стандартний розчин 0,06 г/л; розчинник (бутанол, оцтова кислота і вода в співвідношенні 15:15:10); нингидрин, 0,5%-ний розчин в ацетоні; хлорид заліза (III), 10%-ний розчин; набір В«Біофан ПВ» (НДР), що містить індикаторну папір з кольоровою шкалою.
Обладнання. Хроматографічна папір 11х11; мікропіпеткі; чашка Петрі; ножиці; сушильну шафу, відрегульований на 90-100? С; фільтрувальний папір; штатив із пробірками; піпетки місткістю 1 мл; очні піпетки. p align="justify"> Матеріал.
Сеча, нормальна і патологічна, що містить фенілпіровиноградну кислоту.
Плазма крові здорової і хворої людини з підвищеним вмістом фенілаланіну.
а. Експрес-визначення фенілаланіну в плазмі крові методом паперової радіальної хроматографії. Метод заснований на різній швидкості пересування фенілаланіну по хроматографічної папері внаслідок різниці коефіцієнтів розподілу його між нерухомою і рухомою фазами розчинника. Положення амінокислот на хроматограмі, яка представлена ​​у вигляді концентричних кіл, виявляється Нінгідринова реакцією. p align="justify"...
