/sup>; m - маса наважки досліджуваного виробу, г; V 2 - Обсяг досліджуваного розчину, витрачений на титрування, мл; W- масова частка вологи в досліджуваному матеріалі (ГОСТ 21094); 1000 - переклад мг сахарози в г; 2 - подвійне розведення витяжки при проведенні гідролізу сахарози. В
Фізико-хімічні методи визначення цукрів
У Нині знаходять широке застосування фізико-хімічні методи визначення цукрів. При цьому цукру, шляхом хімічних реакцій, перетворюють на якийсь речовина, заміряючи потім фізичні характеристики (колір, адсорбируемого і пр.) Ці методи швидкі, менш трудомісткі, а в деяких випадках точніше хімічних. <В
Кількісне визначення цукрів у продуктах рослинного походження за допомогою хроматографії на папері (по О. А. Павлюшіной)
Кількісне визначення цукрів із застосуванням хроматографії на папері включає в себе наступні основні операції:
фіксацію рослинного матеріалу> екстракцію цукрів та очистку витяжки від білків та інших домішок> розподільну хроматографію цукрів на папері> елюацію цукрів з паперу> визначення їх змісту в Елюат
Реактиви і матеріали: а) Хроматографічна папір Ленінградська В«швидкаВ» № 1; * Filtrak * FN-4; ватман М 1 і 2, б) етанол, 96%-ний і 80%-ний; в) уксуснокислий свинець (СН 3 СОО) 2 РЬ в€™ 3Н 2 О, 10%-ний розчин; г) сірчанокислий натрій, насичений розчин; д) суміш н-бутанолу, піридину і води в співвідношенні 6:4:3 (за обсягом), або суміш н-бутанолу, оцтової кислоти і води в співвідношенні 4:1:5 (за обсягом). [ Якщо суміші розчинників поділяються на два шари, то беруть верхній; ] е) проявники на кетози: 1 - резорцінфосфат. p> 0,2 г резорцину розчиняють в 100 мл 96%-нозі етанолу. Перед проявом хроматограми змішують 10 об'емзв спиртового розчину резорцину з одним об'ємом ортофосфорної кислоти Н 3 РВ 4 (щільність 1,75-1,82);
2 - N-хлормочевіна. p> 5 г сечовини розчиняють в 100 мл 96%-ного спирту і додають 20 мл 2 н розчину соляної кислоти;
ж) проявники на альдози: 1 - анілінфталат
1,66 г фталевої кислоти і 0,93 г перегнанного аніліну розчиняють в 100 мл етилового спирту, насиченого водою;
2 - Аніліноксалат:
0,93 г перегнанного аніліну розчиняють у 50 мл 96%-ного етанолу, після чого змішують з рівним об'ємом 0,2 М розчину щавлевої кислоти в етанолі (можна також брати водний 0,2 М розчин щавлевої кислоти);
і) глюкоза, фруктоза, сахароза та інші цукру, 2% ~ ні розчини; к) інші реактиви для кількісного визначення цукрів по антроновому методу.
Хід роботи : Наважку свіжого рослинного матеріалу (10 - 30 г) заливають (для фіксації) десятикратним об'ємом киплячого 96%-ного етанолу, нагрівають 2-3 хв., додаючи невелику кількість вуглекислого кальцію або натрію у порошку для нейтралізації кислот (під контролем лакмусу або універсального індикатора). Зафіксована навіс (в колбі або склянці з притертою пробкою) може зберігатися протягом декількох місяців (в темному і прохолодному місці). Фіксація спиртом є і початком екстракції цукрів, які частково переходять в розчин. Сахара екстрагують гарячим (70-80 Вє С) 80%-ним етанолом 3 рази по 30 хв. Перед початком екстракції рекомендується додатково розтерти матеріал у ступці. Спирт, який служив для фіксації навішування, об'єднують зі спиртовими витяжками. Після кожної екстракції охолоджену спиртову витяжку центрифугують. Об'єднані спиртові витяжки згущують у вакуумі до об'єму 3 мл. Якщо матеріал багатий хлорофілом і каротиноїдами, то згущену витяжку кілька разів збовтують з петролейним ефіром. Ефірний розчин пігментів зливають, а залишки розчинника видаляють на водяній бані при 50-60 В°. Згущену витяжку кількісно переводять у мірну колбу на 5 або 10 мл. Для осадження білків та інших домішок додають по краплях розчин оцтовокислого свинцю. Перевіривши повноту осадження, розчин у колбі доводять до мітки, потім фільтрують або, ще краще, центрифугують. Для осадження надлишки свинцю, що не пішов в реакцію, додають одну краплю насиченого розчину сірчанокислого натрію і знову центрифугують або фільтрують. Нарізають смуги хроматографічного паперу довжиною 50-55 см і шириною 13-19 см або іншого розміру (залежно від діаметру хроматографічної камери). Папір разліновивают графітовим олівцем, залишаючи з одного боку аркуша одну, а з інший - дві контрольні смуги шириною 2 - 2,5 см. Низ хроматограми вирізають зубцями, що сприяє рівномірному скапиванію розчинника і запобігає спостерігається іноді перекіс плям. Потім на лінію старту окремими плямами по одному на основній частині хроматограми і на кожній з контрольних смуг наносять за допомогою мікропіпеткі або капіляра певний точний обсяг випробуваного розчину (наприклад, по 0,01; 0,02 або 0,03 мл в пляма). Кількість екстракту, завдається в пляму, має відповідати приблизно 30-50 мг сирої ваги досліджуваного матеріалу в тому випадку, якщо ...
