світа в ході неї багаторазово заряджених примірників великих молекул. Це важливе явище, тому що мас-спектрометр вимірює відношення маси до заряду ( m / z ) і тому багаторазова зарядка робить можливим спостерігати дуже великі молекули за допомогою інструменту з відносно малим діапазоном мас. На щастя, програми, придатні для всіх мас-спектрометрів з електроспреем, дозволяють зробити обчислення молекулярної маси, необхідні для визначення дійсної маси багатозарядних зразків.
Рис. 1.6 і
1.7 показують різні заряджені стану двох різних білків, де кожен пік у мас-спектрах може бути поєднана з різними зарядовими станами молекулярного іона. Багаторазова зарядка має інші важливі переваги в тандемної мас-спектрометрії. Одне з переваг полягає в тому, що після фрагментації ви спостерігаєте більше фрагментарних іонів від многозарядного попередника, ніж від однозарядного.
Багаторазова зарядка: білок з масою 10000 дальтон і його теоретичний мас-спектр з набоями до +5 показані на рис. 1.8 . Маса білка залишається такою ж в той час, як ставлення m / z міняється залежно від числа зарядів на білку. Іонізація білка є зазвичай результат протонування, що ні тільки додає заряд, але також збільшує масу білка на число доданих протонів. Ця дія на m / z застосовно однаково для будь-якого механізму іонізації молекули, що утворив позитивно чи негативно заряджений молекулярний іон, включаючи приєднання або відрив несучих заряд частинок, відмінних від протона (наприклад, Na + і Cs + ). Багаторазові позитивні заряди спостерігаються для білків, у той час як для олігонуклеотидів типово освіта негативних зарядів (з ESI).
В
Хоча мас-спектрометри електроспрея забезпечені програмами, які підраховують молекулярна вага, розуміння, як комп'ютер виробляє ці обчислення для багаторазово-заряджених іонів корисно. Рівняння 1.1 - 1.5 і рис. 1.9 представляють просте пояснення, де ми приймаємо, що піки p1 і p2 є сусідніми і розрізняються одним зарядом, що еквівалентно додаванню одного протона.
p = m/z
p1 = (Mr + z1)/z1
p2 = {Mr + (z1 - 1)}/(z1 - 1)
(1.1)
(1.2)
(1.3)
p - пік у мас-спектрі
m - загальна маса іона
z - повний заряд
Mr - середня маса білка
p1 - значення m/z для p1
p2 - значення m/z для p2
z1 - заряд для піку p1
Рівняння 1.2. і 1.3. можуть бути вирішені для двох невідомих, Mr і z1.
Для піків у мас-спектрі міоглобіну, показаному на рис. 1.9 , p1 = 1542, p2 = 1696.
1542 z1 = Mr + z1
1696 (z1 - 1) = Mr + (z1 - 1)
Вирішивши два рівняння, знаходимо: Mr = 16,951 Da
для...
