рменту зростає. Встановлено, що швидкість синтезу полімеру в R.eutropha, що вирощується на різних джерелах вуглецю, суворо залежить від концентрації в клітці НАДФН. Ці дані підтверджують раніше висунуте припущення про те, що редуктаза визначає швидкість синтезу полімеру в клітці. p align="justify"> Третім ключовим ферментом біосинтезу, який визначає тип ПГА, є ПГА - синтаза.
Таким чином, у синтезі полігідроксіалканоатов беруть участь три ферменту. Перші два відповідають за синтез субстратів, причому кетотіолази включає синтез полімеру. ПГА - синтаза визначає кількість і якість синтезованого ПГА. p align="justify"> 1.3 Властивість і структура ПГА - синтази, виділеної з R.eutropha
В даний час виділено та охарактеризовано понад 50 структурних генів синтази з різних мікроорганізмів. ПГА - синтаза з R.eutropha складається з одного типу субоедениц з молекулярною масою близько 64 кДа і кодується геном phbC. У клітці ПГА - синтаза знаходиться в двох формах: розчинної і пов'язаної з гранулами полімеру. Обидві форми найбільш активно використовуються для побудови полімерних молекул коротколанцюговий (від 3 до 5 атомів вуглецю) 3-гідроксіаціл-КоА і це свідчить про суворої специфічності ферменту до коротколанцюгового похідним. Ці дані були підтверджені в системі синтезу полімеру in vitro. ПГА - синтаза, виділена з рекомбінантного штаму Е. coli, з трансформованим ПГА - сінтазним геном з R.eutropha, високоактивних з 3-ОН-С 4 -КоА і 3-ОН-С 5 -КоА субстратами. З 3-ОН-С 6 -КоА активність ферменту різко знижується і складає всього 0.94% від такої з гідроксибутират-КоА. Найбільша спорідненість фермент має по відношенню до кислот з ОН-групою в ? - положенні. Переміщення ОН-групи до метильних кінця знижує здатність субстрату зв'язуватися з ферментом, проте не впливає на швидкість синтезу полімеру. Також доведено, що локалізація гідроксилу у карбоксильного кінця повністю дезактивує фермент. До справжнього моменту показано, що субстратна специфічність ПГА - синтази in vivo може істотно відрізнятися від її характеристик in vitro. ПГА - синтаза in vivo може включати в полімер в невеликих кількостях і більш довгі гідроксикислоти - З 6 , С < span align = "justify"> 8 і С 10 . Це свідчить про більш широкому спектрі субстратів, що використовуються синтазою для побудови полімерів. Різниця в субстратної специфічності ферменту in vivo і in vitro може бути пов'язана з термінами спостереження за включенням субстратів в ПГА, або різницею в специфічному середовищі оточення ферменту. Отримані дані свідчать ...
