про конститутивний синтезі ПГА-синтази. Наприклад, в умовах ліміту по вуглецю R.eutropha синтезує переважно розчинну форму ферменту, а при перенесенні культури в умови дефіциту азоту, активність розчинної ПГА-синтази різко падає, і в клітинах в основному визначають гранулозавісімую форму ферменту. При цьому сумарна активність ферменту залишається на одному і тому ж рівні (0.05 u/mg protein). Розчинну форму ПГА-синтази в достатній кількості виділили з рекомбінантного штаму Е. coli, який містив ПГА - сінтазний ген. Рекомбінант виявився здатним синтезувати фермент з високим виходом, але так як в середовищі відсутні субстрати, в клітинах накопичувалася тільки розчинна форма ферменту. Молекулярний вага розчинної синтази становить 64 кДа. Кінетичний аналіз показав, що реакція полімеризації 3-ОН-С 4 -КоА з цим ферментом починається після досить тривалої лаг фази, яка збільшувалася при зниженні концентрації ферменту в реакційній суміші. Ці спостереження дозволили припустити, що для скорочення тривалості лаг фази необхідний праймер, який дозволив би переводити фермент із мономерного в дімерная стан. І, дійсно, використання в реакції полімеризації олігомеру 3-ОН-С 4 виключило лаг фазу, а в реакційній суміші при цьому виявили мономірні і димерні форми ферменту. До теперішнього часу доведено, що тільки дімерная форма ферменту має каталітичної активністю. Це добре узгоджується з механізмом реакції полімеризації, згідно з яким в реакцію полімеризації повинні включатися дві тіольний групи. Однак у ПГА - синтази виявлено тільки один цистеїн в положенні 319, що відповідає за утворення полімерних ланцюгів. Досить багато було висунуто припущень про посттрансляційних модифікаціях ферменту пантотенової кислотою, яка могла б ввести другу тіольний групу для успішної роботи ферменту. Однак найбільш доказової виявилася модель утворення активного ферменту у вигляді димеру, у якого дві тіольний групи розташовані в Cys319, локалізуючі в консервативному ділянці субодиниць. На підставі цих даних була запропонована модель - механізм полімеризації мономерів, аналогічний синтезу ацильних ланцюгів жирних кислот, згідно з якою димеризация ПГА - синтази необхідна для формування активного центру з двома ідентичними тіольний групами. Останні утворюють сайти зв'язування з субстратом і зростаючої полімерної ланцюгом, при цьому зростаючий ланцюг переходить з одного тіольної групи на іншу. Зростаюча ланцюг полімеру стабілізує димерную структуру ферменту; останній перебуває в клітці в гранулосвязанной формі і локалізується на поверхні полімерних гранул.
Одним з базових властивостей полігідроксіалканоатов є молекулярна маса. Різні мікроорганізми або один і той же організм у різних умовах зростання синтезують полімери з молекулярною масою від сотень до мільйона дальтон. Наявні результати свідчать про те, що за дов...
