показує кращі результати. При цьому ген, з яким ведеться робота, повинен бути не тільки картірован, а й ідентифікований (повинна бути відома його функція). До теперішнього часу картіровано близько однієї тисячі генів, включених в процес виникнення і розвитку моногенних спадкових захворювань, з яких ідентифіковано всього кілька сотень.
При генотерапіі потрібні попереднє створення рекомбінантної генетичної конструкції з нормальною «здорової» копією дефектного гена, а також створення для цієї конструкції вектора, що переносить її в клітини організму. Для нормального функціонування гена необхідні специфічні для кожного гена цис-і трансрегуляторние послідовності. Перші (цис) локалізовані в тій же хромосомі і можуть бути безпосередньо зчеплені з геном або перебувати на деякій відстані від регульованого ними гена, виступаючи як промотора; нюрие (транс) розташовуються в інших хромосомах.
Методи введення генів у клітини-мішені при генотерапіі вельми різноманітні, але в більшості випадків недостатньо ефективні. Це пов'язано з встраиванием чужорідної ДНК в геном тільки невеликого відсотка клітин тканини, а також з руйнуванням її нуклеазами і т.д. Обнадійливі результати отримані при використанні генів, «упакованих» в ліпосоми.
В даний час найбільш перспективним шляхом переносу генів при генотерапіі є включення їх в вектори, побудовані на основі ретро-або аденовірусів. Звичайно, тут перш за все виникає питання про безпеку подібних векторів. Віруси генетично модифікуються так, щоб при збереженні здатності проникати в клітку вони втрачали б здатність до автономної реплікації.
Для спрямованої доставки сконструйованої послідовності враховується різний тропізм різних вірусів до певних видів тканин. Так, представники аденовірусів високотропни щодо клітин епітелію дихальних шляхів, вірус герпесу високотропен відносно нейронів ЦНС і т.д. У перспективі планується проводити генотерапію за допомогою цілих рекомбінантних хромосом, що дозволяє оперувати поруч генів і їх регуляторних послідовностей одночасно.
Сучасна генотерапія спрямована тільки на соматичні, а не на статеві (зародкові) клітини.
Генотерапія ех vivo (поза організмом) означає, що нормальна копія гена вводиться в соматичні клітини, попередньо витягнуті з організму пацієнта. Виправлені клітини нарощуються і вводяться пацієнтові трансфузией або трансплантацією. При цьому рекомендується використовувати клітини саме від цього хворого і їх «виправлене» потомство повертати йому ж, що знімає проблему відторгнення клітин за рахунок вродженого імунітету. Проте використання тільки аутологічних клітин звужує можливість генотерапіі, тому розроблені різні методи захисту від імунної відповіді і неаутологачних клітин, які включають, зокрема, застосування імуносупресорів.
При генотерапіі in vivo доставка нормального гена здійснюється безпосередньо в тканини людини (в клітини певних тканин). При цьому промотор гена повинен бути трансспеціфічен.
Перелік спадкових хвороб, пов'язаних з недостатністю того чи іншого ферменту, зростає в міру розкриття їх біохімічного механізму. Відповідно і підходи до реалізації теоретичних можливостей генотерапіі привертають все більшу увагу і конкретизуються. Як приклад можна привести використання генотерапіі в лікуванні муковісцідо-за. Ген муковісцидозу - муко...
