розчину вміст 5 ампул фолликулина виливають в ділильну воронку, що містить 50 мл етанолу. Воронку струшують і після розшарування фаз нижній, масляний шар відкидають, а для дослідження використовують верхній - спиртовий розчин). p align="justify"> а. Реакція на фенольну групу естрону (фолликулин) з сірчаною кислотою. Метод заснований на взаємодії естрону і сірчаної кислоти з утворенням сполуки, що має солом'яно-жовтий колір, що переходить при нагріванні в помаранчевий. p align="justify"> Хід визначення. У суху пробірку вносять 5 крапель спиртового розчину фолликулина і поміщають її на 5 хв у киплячу водяну баню (для випаровування спирту). p align="justify"> Додають в пробірку 1 мл концентрованої сірчаної кислоти і ставлять її на 5-10 хв у киплячу водяну баню. Спостерігають за зміною фарбування вмісту пробірки. p align="justify"> б. Реакція на фенольну групу естрону (фолликулин) з реактивом Фоліна. Принцип методу див. роботу 58. p align="justify"> Хід визначення. У пробірку вносять 5 крапель спиртового розчину фолликулина і додають по 2 краплі розчину гідроксиду натрію і реактиву Фоліна. Спостерігають за появою синього забарвлення, обумовленого наявністю фенольної групи в молекулі естрону. p align="justify"> в. Реакція на 17-кетогруппу естрону (фолликулин) і на 17-кетостероїди, що містяться в сечі. Метод заснований на здатності 17-кетостероїдів утворювати з м-динітробензолу в лужному середовищі продукти конденсації вишнево-червоного кольору. p align="justify"> Хід визначення. В одну пробірку вносять 5 крапель спиртового розчину фолликулина, в іншу - 5 крапель сечі і додають в них по 5 крапель розчинів гідроксиду натрію і м-динітробензолу. Перемішують вміст струшуванням і спостерігають за розвитком характерного фарбування. p align="justify"> Оформлення роботи. Дані занести в таблицю. У висновку вказати на можливість використання реакції для визначення стероїдних гормонів. br/>
МатеріалВиявляемая группаРеакціяОкрашіваніе
Практичне значення роботи. Специфічні реакції на гормони різної структури використовуються для їх кількісного визначення і при аналізі гормональних препаратів у контрольно-аналітичних лабораторіях. Визначення продуктів обміну стероїдних гормонів 17-кетостероїдів використовується в клініці для оцінки функціонального стану кори надниркових і статевих залоз. До 17-кетостероїдів відносяться естрон і андростерон; частина їх утворюється з 17-гідроксістероід (кортизол, кортизон) в корі надниркових залоз. У нормі вміст 17-кетостероїдів у добовій сечі становить у чоловіків 0,10-0,16 г, у жінок 0,06-0,13 м. У стані стресу (напруги) підвищується вміст кортикостероїдів в крові і збільшується виділення їх з сечею.
Робота 83. Регуляція інсуліном та адреналіном рівня глюкози в крові тварин
Реактиви. Цитрат натрію, 10%-ний розчин; хлорид натрію, 9 г/л розчин; етанол, 70%-ний. p align="justify"> Обладнання. Шприци; ін'єкційні голки; ножиці; вата; мікропіпеткі; ваги. Решта реактиви та обладнання як в роботі 46. p align="justify"> Матеріал.
Інсулін у флаконах для ін'єкцій, 40 ОД/мл.
Адреналін, 0,1%-ний розчин для ін'єкцій.
Об'єкт дослідження. Кролики. p align="justify"> Метод заснований на визначенні в динаміці вмісту глюкози в крові після введення інсуліну або адреналіну. Концентрація глюкози в крові вимірюється о-толуїдиновим методом, описаним в роботі 48. p align="justify"> Хід визначення. Для взяття крові беруть двох кроликів, голодували 12 ч. Їх зважують, вистригають шерсть на вусі, знаходять крайову вену, затискають її пальцем біля основи вуха. Після того, як вена наповнився кров'ю, її проколюють ін'єкційної голкою і витікаючі краплі крові збирають на годинному склі, змоченим розчином цитрату натрію (щоб кров не згорнулася). Набирають приблизно 0,5 мл крові, ранку на вусі кролика затискають ватним тампоном, змоченим етанолом, протягом півхвилини. p align="justify"> Одному кролику вводять розчин інсуліну, розведений хлоридом натрію з розрахунку 1,5 ОД на 1 кг маси тіла, а іншому - розчин адреналіну з розрахунку 0,35 мл на 1 кг маси тіла. Через 30 і 60 хв у обох кроликів забирають кров, як описано вище. p align="justify"> мікропіпетку відбирають по 0,1 мл крові, взятої перед досвідом і через 30 і 60 хв після введення інсуліну та адреналіну. Визначають вміст глюкози в крові за методикою, описаної в роботі 46. p align="justify"> Примітка. Після введення інсуліну постійно спостерігають за кроликом, так як більша доза інсуліну може викликати різке зниження вмісту цукру в крові і привести до смерті. Якщо у кролика почнуться ознаки судом, слід негайно ввести 1 мл адреналіну. По закінченні досвіду кролику вводять 20 мл 20%-ного стерильного розчину глюкози під шкіру. p align="justify"> Оформлення роботи. Отримані результати занести в таблицю і п...
