нішим для клініки, - біологічні рідини, головним чином кров і сеча. p align="justify"> Кров є рідкою тканиною організму, що складається з клітин і плазми. Обмін речовин клітин крові частково відображає загальні закономірності метаболізму, за якими можна судити про його зрушеннях в інших тканинах. Однак формені елементи крові виконують також спеціальні функції, для оцінки яких вивчають відповідні біохімічні показники. Складові компоненти плазми (білки, небілкові органічні і мінеральні речовини) дають необхідну інформацію про функції власне крові (транспортної, регуляторної і т.д.) і про зміни метаболізму, які сталися в різних тканинах. p align="justify"> Біохімічні дослідження сечі дозволяють судити про зміни не тільки в видільної та мочеобразовательной функціях нирок, а й про обмін речовин в інших органах і організмі в цілому.
1. Біохімічні дослідження крові
Робота 85. Визначення вмісту гемоглобіну в крові за його светопоглощению
Реактиви. Гідроксид амонію, 0,4 г/л розчин. p align="justify"> Обладнання. Штатив із пробірками; піпетки місткістю 0,1 і 10 мл; ФЕК. p align="justify"> Матеріал. Кров, взята з пальця обстежуваного. p align="justify"> Метод заснований на вимірюванні при 450 нм світлопоглинання міститься в крові гемоглобіну, яке пропорційно його концентрації.
Хід визначення. У пробірку відмірюють 8 мл розчину гідроксиду амонію. Мікропіпеткою беруть з пальця обстежуваного 0,05 мл крові і вносять її в пробірку. Мікропіпетку тричі обполіскують цим же розчином, ретельно перемішують вміст, при цьому відбувається повний гемоліз еритроцитів і просвітлюється рідина. Пробірку струшують 2-3 хв для повного дизельні гемоглобіну. p align="justify"> Визначають екстинкцію гемолизированной крові проти води на ФЕК при 540 нм (світлофільтр зелений) в кюветі з товщиною шару 0,5 см.
Розрахунок. Вміст гемоглобіну в крові визначають за калібрувальним графіком, побудованим по серії розчинів кристалічного гемоглобіну з відомими концентраціями. p align="justify"> Оформлення роботи. За отриманими екстинкція визначити вміст гемоглобіну в крові (в г/л), зробити висновок про можливу зміну кількості гемоглобіну і вказати ймовірні його причини. p align="justify"> Практичне значення роботи. Нормальний вміст гемоглобіну у дорослої людини становить у чоловіків 130-160 г/л, у жінок 120-140 г/л. У новонароджених концентрація гемоглобіну вище, ніж у дорослих, а до кінця першого року життя вона зменшується до 110 г/л і знову досягає рівня дорослої людини в період статевої зрілості. Знижений вміст гемоглобіну (анемія) спостерігається при крововтратах, нестачі заліза в організмі, дефіциті вітаміну В12 і фолієвої кислоти, при отруєнні ліками і токсичними речовинами, що викликають гемоліз еритроцитів (гемолітична анемія) і т.д. Високий вміст гемоглобіну (200 г/л і вище) має місце при підвищеній кількості еритроцитів у крові (поліцитемія). br/>
Робота 86. Визначення вмісту фетального гемоглобіну в еритроцитах крові людини
Реактиви. Розчин ферріацетонціангідрата *; розчин ацетонциангидріна *; денатуруються розчин їдкого натрію *; осаджуючий розчин сульфату амонію (3,28 моль/л) *. p align="justify"> Обладнання. Штатив із пробірками; піпетки місткістю 0,1; 0,2 і 5,0 мл; центрифуга з Центрифужна вагами; секундомір; обеззоленние фільтри; спектрофотометр або фотоколориметр. p align="justify"> Матеріал. Гепаринизированной кров. p align="justify"> Метод заснований на здатності ацетонциангидріна у присутності розчину гемоглобіну утворювати ціанметгемоглобін (гемоглобінціанід), інтенсивність забарвлення якого пропорційна вмісту гемоглобіну в пробі.
Хід визначення. Кров у кількості 1-2 мл, отриману при наявності гепарину, центрифугують при 3000 об/хв протягом 10 хвилин. Після центрифугування плазму зливають і залишився осад еритроцитів відмивають 8-10 обсягами ізотонічного розчину хлористого натрію. Центрифугують при 3000 об/хв протягом 10 хвилин і відсмоктують супернатант. З отриманих еритроцитів готують еритроцитарної масу шляхом розведення фізіологічним розчином у відношенні 1:1, яка і використовується для отримання гемолізаті. З цією метою до 0,2 мл еритроцитарної суспензії додають 5 мл розчину ферріацетонціангідріна. В отриманому гемолізаті проводять визначення вмісту загального і фетального гемоглобіну. При визначенні загального гемоглобіну через 15 хвилин до 0,1 мл отриманого гемолізаті додають 5 мл розчину ацетонциангидріна. При визначенні фетального гемоглобіну до 3,0 мл гемолізаті додають 0,2 мл гідроксиду натрію (для денатурації нормального гемоглобіну) і витримують точно 2 хвилини (за секундоміром) при температурі 22-24 В° С та потім додають 3,2 мл розчину сульфату амонію. Пробірку струшують кілька разів і через 10 хвилин вміст фільтрують через подвійний обеззоленний фільтр діаметром 9 см.
