tify"> Розчини загального та фетального гемоглобіну фотометрують на спектрофотометрі при довжині хвилі 420 нм.
В якості контролю служать: для визначення загального гемоглобіну - розчин ацетонциангидріна, для визначення фетального гемоглобіну - 0,2 мл гідроксиду натрію і 3,2 мл сульфату амонію.
Розрахунок проводиться за формулою
фетал.Нв? (6,4/3,0)? 100
% Нв = --------------,
загальний Нв? 51
де 6,4 - кінцевий обсяг фетального гемоглобіну після денатурації гідроксидом натрію і осадження сульфатом амонію;
, 0 - вихідний обсяг гемолізаті, що містить загальний гемоглобінціанід;
- фактор розбавлення загального гемоглобінціаніда;
- переведення у відсотки.
Оформлення роботи. За екстинкції розрахувати вміст фетального гемоглобіну, порівняти з нормою і зробити висновок про можливі відхилення. p align="justify"> Практичне значення роботи. У нормі вміст фетального гемоглобіну в еритроцитах становить 0,75-0,97%. Підвищення фетального гемоглобіну є важливим критерієм для діагностики бета-таласемії, при якій одночасно підвищується і вміст гемоглобіну А2. Особливо високий вміст фетального гемоглобіну може бути при гомозиготною бета-таласемії до 20-90%. При гетерозиготною формі бета-таласемії вміст фетального гемоглобіну може бути нормальним або помірно підвищеним - 2,57%. p align="justify"> Слід зазначити, що збільшення вмісту фетального гемоглобіну однак не є специфічним для бета-таласемії. Воно зустрічається і при інших станах: гемолітичних анеміях, залізодефіцитної гипопластической анемії, лейкозі та інших станах, що супроводжують гіпоксією, що ймовірно, пов'язано з компенсаторними процесами. br/>
Робота 87. Визначення вмісту глікозильованого гемоглобіну в еритроцитах крові фотоколориметричним методом
Реактиви. +40%-Ний розчин трихлороцтової кислоти, 1 М розчин щавлевої кислоти; 0,05 М розчин тіобарбітурової кислоти; 0,04%-ний розчин гідроксиду амонію; 0,9%-ний розчин хлориду натрію. p align="justify"> Обладнання. Центрифуга лабораторна; ФЕК (спектрофотометр); водяна баня; термостат; пробірки з щільно притертими пробками. p align="justify"> Матеріал. Кров забирають натщесерце з ліктьової вени. Додають гепарин з розрахунку 5ед/1мл для запобігання згортання. Еритроцити відокремлюють від плазми центрифугуванням 3000 об/хв протягом 10 хвилин і трикратно відмивають фізіологічним розчином. Потім до суспензії еритроцитів додають дистильовану воду і 1-2 краплі хлороформу для гемолізу. p align="justify"> Метод заснований на здатності 5-гідроксіметілфурфурола, що утворюється з вуглеводного компонента глікозильованого гемоглобіну при його кислотному гідролізі, утворювати з тіобарбітурової кислотою забарвлене з'єднання, інтенсивність забарвлення якого пропорційна вмісту глікозильованого гемоглобіну в еритроцитах.
Хід визначення.
Визначення концентрації гемоглобіну в гемолізаті.
У пробірку внести 8 мл розчину аміаку і додати 0,05 мл гемолізаті (мікропіпеткою, багаторазово промиваючи її розчином аміаку). Струшувати 2 хвилини, після чого визначити екстинкцію на ФЕК (довжина хвилі 540 нм, зелений світлофільтр) проти розчину аміаку. Вміст гемоглобіну в гемолізаті в г/л визначають за калібрувальним графіком. ol>
Визначення процентного вмісту глікозильованого гемоглобіну.
У пробірку внести обсяг гемолізаті, що містить 10 мг гемоглобіну, довести до 1 мл 0,9% розчином хлориду натрію, додати 1 мл 1 М щавлевої кислоти, щільно закрити пробкою і інкубувати в термостаті при 100? З протягом 5 годин.
Пробірку охолодити, внести 1 мл 40% розчину трихлороцтової кислоти, ретельно перемішати і центрифугувати 10 хвилин при 3000 оборотів в хвилину.
У чисту пробірку відібрати 2 мл надосадової кислоти, перемішати і інкубувати 40 хвилин на водяній бані при 40 Вє С, після чого фотометрують при довжині хвилі 443 нм проти дистильованої води.
Зміст глікозильованого гемоглобіну (у% від загального) визначають за калібрувальним графіком.
Практичне значення роботи. Зміст глікозильованого гемоглобіну в нормі становить від 3 до 5,5% від загального. Відомо, що рівень глікозильованого гемоглобіну може бути показником рівня глікемії за попередні 2-3 місяці. У зв'язку з цим визначенням рівня глікозильованого гемоглобіну в даний час застосовують для ранньої діагностики та оцінки компенсації цукрового діабету. Крім цукрового діабету, підвищення рівня глікозильованого гемоглобіну може спостерігатися при кістозному фіброзі, захворюваннях, що супроводжуються укороченням життя ер...
