итроцитів, хронічної ниркової недостатності. br/>
Робота 88. Визначення концентрації гаптоглобіну в сироватці крові фотоколориметричним методом
Реактиви. Гемоглобін, 5 г/л розчин; ріванол, 3 г/л розчин; сульфат амонію, 10%-ний розчин. p align="justify"> Обладнання. Штатив із пробірками; піпетки місткістю 1 і 2 мл; центрифуга з Центрифужна вагами; ФЕК. p align="justify"> Матеріал. Сироватка крові. p align="justify"> Метод заснований на осадженні риванолом утворюється комплексу гемоглобін-гаптоглобін. Надлишок доданого до сироватці крові гемоглобіну після осадження риванолом визначається фотоколориметрично. p align="justify"> Хід визначення. У центрифужну пробірку вносять 0,5 мл сироватки, 0,2 мл розчину гемоглобіну і 0,3 мл дистильованої води. У контрольну пробірку вносять ті ж речовини, тільки замість розчину гемоглобіну доливають 0,2 мл дистильованої води. p align="justify"> Вміст обох пробірок ретельно перемішують збовтуванням, через 10 хв додають у них по 2 мл розчину риванолу і залишають стояти 5 хв.
Проби центрифугують 10 хв при 3000 об/хв. Прозору або злегка опалесцентну надосадову рідину зливають у дві чисті пробірки, додають по 0,2 мл 10%-ного розчину сульфату амонію (для просвітління рідині) і залишають стояти при кімнатній температурі 20 хв. p align="justify"> У стандартну пробірку поміщають 2,8 мл дистильованої води, 0,2 мл розчину гемоглобіну і 0,2 мл сульфату амонію.
Вимірюють екстинкцію всіх трьох проб проти води на ФЕК при 540 нм (світлофільтр зелений) в кюветі з товщиною шару 1 см.
Розрахунок проводять за формулою
[Їсть - (Еоп - Ек)] 2000? 0,003
х = ---------------,
Їсть
де х - вміст гаптоглобіну в сироватці крові, г/л;
Еоп - екстинкція дослідної проби;
Ек - екстинкція контрольної проби;
Їсть - екстинкція стандартної проби;
- перерахунок на літр сироватки;
, 003 - вміст гемоглобіну в стандартній пробі, г/л.
Оформлення роботи. За значеннями екстинкції розрахувати вміст гаптоглобіну в сироватці крові. Зробити висновок про можливі зміни кількості Гаптоглобін. p align="justify"> Практичне значення роботи. У сироватці крові дорослої здорової людини концентрація гаптоглобіну становить 0,28-1,90 г/л. Гаптоглобін входять до складу фракції ? - глобулінів сироватки крові. У новонароджених Гаптоглобін, як правило, відсутні. Вони починають з'являтися у віці один-два місяці і досягають рівня дорослих до першого півріччя. Гаптоглобін пов'язують внеерітроцітарний гемоглобін, утворюючи з ним комплекс. Тим самим гаптоглобин виконує в організмі захисну функцію, наприклад, при руйнуванні еритроцитів (гемолізі). При гемолізі гаптоглобин перешкоджає екскреції гемоглобіну нирками, запобігаючи порушення функції канальців.
Робота 89. Проба Вельтмана в модифікації Тейфеля на колоїдну стійкість білків сироватки крові
Реактиви. Хлорид кальцію, 5 г/л розчин. p align="justify"> Обладнання. Штатив із пробірками; піпетки місткістю 0,1 і 5 мл. p align="justify"> Матеріал. Сироватка крові. p align="justify"> Метод заснований на різній стійкості окремих білкових фракцій сироватки крові до коагуляції під дією певних концентрацій хлориду кальцію і нагрівання.
Хід визначення. У пробірку вносять 0,1 мл сироватки крові і 4,9 мл дистильованої води і перемішують струшуванням. До вмісту додають 0,1 мл розчину хлориду кальцію, пробірку струшують і обережно нагрівають розчин над полум'ям до закипання. Після цього пробірку охолоджують і дивляться на світ. Рівномірне помутніння рідини, незалежно від його інтенсивності, не свідчить про закінчення реакції. Вона завершується тільки при появі пластівців. Якщо ж вони не утворюються, то знову доливають в ту ж пробірку 0,1 мл хлориду кальцію, нагрівають її до закипання рідини і так повторюють, поки не випаде пластівчастий осад. p align="justify"> Відзначають обсяг хлориду кальцію, що пішов на освіту пластівчастого осаду білків, і визначають стан коагуляционной стрічки Вельтмана за схемою
№ проби12345678910CaCl21, 00,90,80,70,60,50,40,30,20,1 ІзмененіяСдвіг влевоНормаСдвіг вправоПатологіяОстрие запальні та ексудативні стану, опухоліПоврежденія печінки, фібрози, гемоліз, хронічні запальні захворювання
Оформлення роботи. Відзначають обсяг хлориду кальцію (в мл), що пішов на освіту пластівчастого осаду. У висновках вказати зміни коагуляционной стрічки Вельтмана. p align="justify"> Практичне значення роботи. Порушення співвідношення білкових фракцій крові (диспротеїнемія) при ряді патолог...
