ацій 50, 100, 200 мкг/мл.
Рис. 3. Визначення тропікаміду методом ВЕРХ (хроматограмма)
Вплив рН середовища на ступінь вилучення тропікаміду органічними розчинниками. Для вивчення впливу рН середовища на ступінь вилучення тропікаміду використовували буферні розчини зі значенням рН від 2 до 11,2. Буферні розчини готували з універсальної буферної суміші, яка містить кислоту борну - 2,47г, кислоту о-фосфорну - 2,4 мл, кислоту оцтову - 2,27мл в 1 літрі води очищеної. Для отримання буфера з певним значенням рН до 100 мл цієї суміші додавали різний обсяг розчину 0,2Н гідроксиду натрію. В результаті проведених експериментів зробили висновок, що максимальне вилучення тропікаміду досягається при рН водної фази 7,9, що теоретично цілком обгрунтовано (рКа - 5,2).
Вибір екстрагента: Для проведення дослідження щодо вибору оптимального екстрагента використовували діетиловий ефір, н-гексан і хлороформ (табл.3).
Таблиця 3 Залежність виходу тропікаміду від характеру екстрагента
ЕкстранентОптіческая плотностьХ1Х2Х3 X ±? ХSXEДіетіловий эфир0,4480,4420,4460,445±0,0070,0021,7Хлороформ0,5890,6060,6030,602±0,0100,0021,67Гексан0,0160,0220,0150,018±0,0090,00253,2
З таблиці випливає, що кращим органічним розчинником для вилучення тропікаміду методом рідина-рідинної екстракції є хлороформ. Задовільні результати були отримані і при використанні діетилового ефіру. Використання гексана недоцільно, зважаючи на його низькою екстракційної здібності.
Ізолювання: На модельному експерименті зроблений вибір оптимального методу ізолювання тропікаміду з біологічного матеріалу. Отруєння тропікаміду найчастіше відбуваються в поєднанні з іншими речовинами (у тому числі з алкалоїдами опію), тому ми використовували методи ізолювання, найбільш часто застосовуються в судово-хімічної практиці. Вихід тропікаміду при ізолювання підкисленою водою в середньому склав 26,4%, ізолювання нейтральним ацетоном до 60% і методом кислотного гідролізу, застосовуваного для ізолювання алкалоїдів опію, лише 18%. Однак, цей метод дає можливість використання його у випадку комбінованих отруєнь з алкалоїдами опію.
Оптимальним елюентом при ТШХ для тропікаміду є 0,1 н. розчин соляної кислоти і спирт етиловий 96%. Використання цих розчинників дозволяє елюіровать Тропикамид до 69,8 і 86,8% відповідно.
Розроблений нами хіміко-токсикологічний метод був апробований на лабораторних тваринах. Білим щурам вводили по 5мл 1% розчину тропікаміду внутрибрюшинно. У тварин брали на аналіз органи: стінку шлунка, печінку і нирки, сечу. У першої щури органи досліджували через 2 години після ін'єкції, а у другої - через добу.
Ізолювання тропікаміду і його метаболітів з тканин внутрішніх органів проводили ацетоновим методом по В.А. Карташову. Виділення тропікаміду з сечі виробляли методом рідина-рідинної екстракції при рН=8 і методом кислотного гідролізу за методикою для визначення опіатів [11]. При дослідженні витягів методом ТШХ Тропикамид був виявлений у всіх внутрішніх органах щурів, крім нирок другий тварини, і сечі. Можливі метаболіти були виявлені тільки в стінці шлунка другому тваринного і в сечі після кислотного гідролізу. Дослідження методом ВЕРХ підтвердило наявність тропікаміду в органах лабораторних тварин (крім нирки щура №2). Результати ВЕРХ дослідження представлені на рис. 4.
Рис. 4 Дослідження тропікаміду методом ВЕРХ (стінка шлунка перший щури)
Кількісний вміст тропікаміду в різних органах встановлювали методом ВЕРХ за методикою, описаної раніше. Результати представлені в табл. 4.
Таблиця 4 Зміст тропікаміду в органах лабораторних тварин
ОрганСодержаніе тропікаміду, мг% Стінка шлунка щури №194,3Стенка шлунка щури №23,3Печень щури №116,9Печень щури №20,73Почка щури №121,9Почка щури №2 -
Проведені експерименти з лабораторними тваринами підтверджують ефективність запропонованої нами схеми хіміко-токсикологічного аналізу, і ці дані можуть бути використані в практиці хімічних відділень бюро СМЕ.
РОЗДІЛ 3. Результати аналізу лікарських речовин методом ТШХ
Для аналізу методом ТШХ використовувалися препарати:
· Тропикамид
· Атропін
· Цикломеду
Основною метою даного аналізу був підбір кращої системи для виконання подальшого поділу препаратів методом ВЕРХ. Аналіз проводився на пластинках Sorbfil ПТСХ-АФ-А-УФ (10х10; з УФ індикатором).
В якості пробних систем були обрані:
1. Ефір
