а при розбіжності результатів вимірювання більше як на 10% - три рази. Після цього обчислюють середнє значення зміни екстинкції за 1 хв. p align="justify"> Розрахунок здійснюється за формулою
х = 320,5? Е,
де х - активність АДГ, мкмоль/(хв? л);
, 5 - коефіцієнт розрахунку активності, виражений в мкмоль перетвореного субстрату за вказаних умов інкубації;
? Е - зміна екстинкції за 440 нм за 1 хв.
Якщо зміна екстинкції за 440 нм перевищує 0,050 за 1 хв, то сироватку крові слід розвести натрій-фосфатним буфером в 2-4 рази. Виміряну величину активності помножити на коефіцієнт розведення. p align="justify"> Для визначення активності АДГ рекомендується брати свежеполученной сироватку крові. При зберіганні активність ферменту знижується, тому значення активності, виміряної після зберігання, слід помножити на відповідний коефіцієнт, встановлений емпірично:
Час зберігання сироватки, сут.01234567Коеффіціент: при 4? С1, 001,031,041,091,111,121,151,17 при 20? С1, 001,181,201,431,471,541,662,38
Оформлення роботи. Порівняти отримане значення активності АДГ з нормою і зробити відповідні висновки. p align="justify"> Практичне значення роботи. Алкогольдегідрогеназа не проявляє абсолютної субстратної специфічності. Цей фермент каталізує окислення, крім етанолу, ряду первинних і вторинних спиртів, етиленгліколю і т.д., причому в деяких випадках з більшою швидкістю, ніж етанолу. АДГ міститься в гіалоплазме клітин багатьох органів і тканин, але в тканини печінки її активність в 20-40 разів вище, ніж в інших. У сироватці крові концентрація ферменту у здорових людей дуже низька і традиційними методами практично не виявляється. Описаний метод дозволяє визначити активність АДГ. У здорових людей активність АДГ в сироватці крові реєструється в межах 0,32-2,56, а в середньому 1,18 мкмоль/хв? Л. У осіб, що зловживають алкоголем, активність ферменту в сироватці крові підвищується в залежності від тривалості прийому алкоголю і стадії алкоголізму. Тест на алкогольдегідрогеназу сироватки крові використовується в діагностиці алкоголізму та контролю ефективності лікування цього захворювання. p align="justify"> Низька активність АДГ при ураженнях печінки, в якій окислюється до 90% надходить в організм етанолу та інших спиртів, або генетична недостатність цього ферменту знижує знешкодження алкоголю і посилює його негативна дія на функції систем організму.
Робота 105. Визначення ацетилюється здатності організму з виділення з сечею вільної і ацетильованій форм сульфаніламідів по А.М. Тимофєєвої в модифікації Г.А. Пономарьова
Процес ацетилювання є однією з різновидів реакцій кон'югації ксенобіотиків, що відбуваються в клітинах за участю ферментів. Ариламіно, в тому числі сульфаніламіди, піддаються N-ацетилювання в організмі і тому з виділення вільної і ацетильованій форм цих речовин можна оцінити активність процесу ацетилювання. p align="justify"> Реактиви. Соляна кислота, 10%-ний розчин; нітрит натрію, 0,5%-ний розчин, свіжоприготований; ацетат натрію, насичений розчин; Н-кислота ацетильованого, свіжоприготований 0,5%-ний розчин. p align="justify"> Обладнання. Водяна баня; штатив із пробірками; пробки, обгорнуті фольгою; піпетки місткістю 1 і 5 мл; ФЕК. p align="justify"> Матеріал. Сеча, яка містить вільний і ацетильований сульфаніламіди. (Для отримання сечі білим щурам вводять внутрішньошлунково за допомогою зонду порошок сульфадимезина з розрахунку 0,5 г на 1 кг маси тіла у вигляді суспензії в 3 мл води. Тварин відкидають на добу в скляні видільні воронки для збору сечі. Зібрану сечу доводять дистильованою водою до обсягу 25 мл і фільтрують через паперовий фільтр).
Метод заснований на здатності диазотированного сульфаниламида при взаємодії з ацетильованій Н-кислотою (1,6-амінооксінафталін-3 ,5-дисульфокислоти) утворювати комплекс рожевого кольору, інтенсивність якого пропорційна концентрації сульфаниламида.
Вміст суми сульфаніламідів (ацетильованих і вільних) в сечі встановлюють після гідролізу проб з соляною кислотою, в ході якого відбувається утворення вільної форми сульфаниламида з ацетильованій.
Хід визначення. У дві пробірки (одна для визначення загального, а інша - вільного сульфадимезина) відмірюють по 1 мл розведеної в 20 разів сечі, по 1,5 мл дистильованої води і по 0,25 мл розчину соляної кислоти. У третю пробірку (контрольна) вносять 2,5 мл води і 0,25 мл розчину соляної кислоти. p align="justify"> Одну пробірку (для визначення загального сульфадимезина) закривають пробкою, оберненої фольгою, і ставлять на гідроліз в киплячу водяну баню на 15 хв. Потім пробірку охолоджують. p align="justify"> У всі три пробірки доливають по 2 краплі розчину нітриту натрію, ретельно перемішують вміст і зал...
