ишають стояти 10 хв. Додають в усі проби по 1,5 мл насиченого розчину ацетату натрію, закривають пробірки пробками та енергійно струшують їх кілька разів. p align="justify"> Додають в усі пробірки по 0,25 мл розчину ацетильованій Н-кислоти. Знову перемішують вміст і залишають стояти проби на 15 хв для розвитку забарвлення. p align="justify"> Вимірюють екстинкцію досвідчених проб проти контролю на ФЕК при 440 нм (світлофільтр синій) в кюветі з товщиною шару 0,5 см.
Розрахунок проводять за формулою
(Е2 - Е1) 100
х = -------,
Е2
де х - ацетилюється здатність організму,% ацетильованого сульфадимезина
Е1 - екстинкція вільного сульфадимезина, що міститься в пробі, не піддалася гідролізу;
Е2 - екстинкція загального сульфадимезина (вільний + ацетильований), що міститься в пробі, підданої гідролізу.
Оформлення роботи. Занести значення екстинкції в зошит і розрахувати ацетилюється здатність організму по Сульфадимезин. Зробити висновок про можливість метаболізму ксенобіотиків допомогою ацетилювання та значенні цього процесу. p align="justify"> Практичне значення роботи. За ступенем ацетилювання сульфаніламідів або інших ксенобіотиків, що піддаються в організмі ацетилювання, судять про активність ферментної системи аріламінацетілтрансферази в клітинах, яка каталізує реакції ацетилювання (кон'югації) різних сполук. Для сульфаніламідів реакція ацетилювання є основним провідним механізмом кон'югації, інші кон'югати для більшості сульфаніламідів утворюються в незначній кількості. Ацетилювання призводить до інактивації (знешкодженню) сульфаніламідів і виведенню їх з організму з сечею. Тому ступінь ацетилювання сульфаніламідів вказує також на співвідношення бактеріостатично активної і неактивної форм препаратів. Чим швидше ацетилюється сульфаниламид, тим менше його бактеріостатична активність
Робота 106. Виявлення ацетилювання (інактивації) гідразиду ізонікотинової кислоти (ГИНК) в організмі
Реактиви. Реактив метаванадата амонію *; соляна кислота, 0,5 М розчин. p align="justify"> Обладнання. Штатив із пробірками; пробки, обгорнуті фольгою; піпетки місткістю 1 і 2 мл; водяна баня. p align="justify"> Матеріал. Сеча, яка містить вільну та ацетильованого форми ГИНК. (Для отримання сечі білим щурам вводять порошок ГИНК в дозі 100 мг на 1 кг маси тіла у вигляді суспензії в 3 мл води через рот за допомогою спеціального зонду. Щурів відкидають на 12 год в скляні видільні воронки для збору сечі. Обсяг сечі доводять водою до 10 мл і фільтрують через паперовий фільтр).
Метод заснований на виявленні вільної форми ГИНК, яка з метаванадата амонію в кислому середовищі дає комплексне з'єднання коричнево-червоного кольору. Різниця в забарвленні між пробами сечі до і після гідролізу вказує на ступінь ацетилювання ГИНК в організмі:
В
Хід визначення. Зібрану сечу розводять у 20 разів дистильованою водою. У дві пробірки вносять по 1 мл розведеної сечі; в одну з них (для визначення загальної ГИНК, тобто суми вільної і ацетильованій форм препарату) додають 1 мл розчину соляної кислоти, а в другу (для виявлення вільної ГИНК) - 1 мл дистильованої води.
Першу пробірку закривають пробкою і ставлять на 20 хв на киплячу водяну баню, після чого охолоджують під струменем водопровідної води. В обидві пробірки доливають по 2 мл реактиву метаванадата амонію і відзначають різницю у фарбуванні досліджуваних проб сечі. p> Оформлення роботи. За різницею у забарвленні проб сечі дати приблизну оцінку ступеня ацетилювання ГИНК в організмі і вказати на значення цієї реакції для практики. p> Практичне значення роботи. Реакція N-ацетилювання ГИНК здійснюється спеціальною ацетилтрансферазою, що міститься в різних тканинах організму. Залежно від активності цього ферменту у різних людей їх ділять на швидких і повільних В«инактиваторовВ» (ацетиляторов) ГИНК, що має значення не тільки для практичної фармакогенетики, а й для раціональної терапії. За ступенем ацетилювання ГИНК встановлюється ефективна індивідуальна доза препарату для конкретного хворого. br/>
1. Дослідження пероксидного окислення ліпідів біологічних мемебрани
Пероксидне (перекисне) окислення ліпідів молекулярною методом являє собою ланцюгової вільно-радикальний процес. Найбільш легко подібним чином окислюються ненасичені ліпіди або вільні жирні кислоти, що входять до складу фосфоліпідів біологічних мембран. Тому швидкість пероксидного окислення ліпідів насамперед впливає на функцію мембран і на розвиток в них патологічних змін. p align="justify"> Зародження цього процесу пов'язують з появою в середовищі, наприклад, пероксидного радикала НО2 ?, ...
