Р-спектрами. Високоефективної рідинної хроматографії проводили на хроматографе з флуоресцентним детектором і колонкою при градієнтному Елюювання сумішами: розчин триетиламіну - фосфатний буфер (рН 3) - метанол. В якості внутрішнього стандарту використовували хінідин. Даний метод досить перспективний в умовах великих лабораторій і може бути запропонований для аналізу амінокислот у готових лікарських формах.
Розроблено методику високоефективної рідинної хроматографії з потенціометричним БІОСЕНСОРИ для кількісного визначення лізину. Біосенсор сконструйований прикріпленням, що містить лізіноксідазу, мембрани до іонно-селективного NH4 + - електроду. Генеруються при ферментативної деградації лізину іони амонію детектируют потенціометрично. Розроблено хроматоденсітометріческій експрес-метод аналізу в культуральних рідинах триптофану. Тонкошарову хроматографію проводили на пластинках «Сорбфіл». Хроматографію здійснювали в системі пропанол - 2 - 25% розчин амонію гідроксид (7: 3) протягом 25 хвилин. Хроматограми висушували при кімнатній температурі і 15 хв витримували при 120? С. Для виявлення плям на хроматограмах використовували специфічний реагент - 4-диметиламінобензальдегідом, виборчий до індольне кільцю триптофану, у вигляді 0,5% етанолового розчину з додаванням 5% кислоти сірчаної концентрованої. Після прояви хроматограмм способом занурення в тефлонову кювету з свіжоприготований розчином 4-диметиламінобензальдегідом, їх витримували протягом 5-7 хвилин при температурі 110? С. Сканування плям триптофану проводили при довжині хвилі 625 нм на комп'ютерному відеоденсітометре. Розроблений метод, незважаючи на високу точність визначення і продуктивність, специфічний по відношенню до триптофану [36].
Для аналізу?-амінокислот в біологічних рідинах, лікарських препаратах, продуктах харчування широко використовуються методи капілярного електрофорезу, засновані на поділі компонентів складної суміші в кварцовому капілярі під дією прикладеного електричного поля [37]. Оскільки амінокислоти мають цвіттеріонов характер, вони можуть бути розділені з використанням буферних розчинів електролітів з відповідним значенням рН, найчастіше використовують нейтральні і основні розділяють буферні розчини [38].
З метою підвищення специфічності та чутливості методу капілярного електрофорезу для аналізу окремих?-амінокислот використовують їх попередню дериватизації, з наступним поділом в кварцовому капілярі і спектрофотометрическим визначенням продуктів реакції. Так, в якості деріватізірующіх агентів використовують 9-флуоренілметілформіат, 9 (2-карбазол) -етілхлорформіат, ціаніновими барвник. Перспективність методу обумовлена ??такими його перевагами, як експресному аналізу, простота підготовки проби, невелика витрата реактивів, простота апаратурного оформлення [39].
1.4.2 Спектрофотометричні методи
Спектрофотометричні методи засновані на здатності амінокислот або продуктів їх взаємодії з певними реагентами поглинати в УФ - області спектра. Ця група методів найбільш широко використовується в даний час для кількісного аналізу?-амінокислот.
Розчини ароматичних амінокислот (триптофану, фенілаланіну, тирозину) поглинають в діапазоні 240-300 нм. На цій підставі розроблені експрес-методи їх кількісного визначення, що відрізняються простотою. Однак, внаслідок того, що максимуми світлопоглинання цих амінокислот близькі, то в процесі кількісного визначення окремих ароматичних амінокислот можливі помилки аналізу. Тому, в більшості випадків, даний метод аналізу є попереднім і потребує додаткового аналізу за допомогою високоефективної рідинної хроматографії, газорідинної хроматографії і амінокислотних аналізаторів [40].
Розроблено простий і точний спектрофотометрический метод аналізу цистину (домішки цистеїну в лікарських препаратах), заснований на здатності його солянокислих розчинів до светопоглощению при довжині хвилі 250 нм. При вивченні аналітичних можливостей методу, встановлено, що цистеїн в це області не поглинає і не заважає визначенню цистину [41].
Враховуючи важливу біологічну роль цистеїну (участь в реакціях трансамінування, обміні сірки в організмі, зокрема, в тканинах кришталика), розробка доступних методів його визначення є важливою аналітичної завданням. Так, розроблена методика кількісної оцінки цистеїну в біологічних рідинах, заснована на його окислювально-відновної реакції з солями заліза (III) в присутності 1,10-фенантроліна з подальшим спектрофотометрическим визначенням продукту реакції. Методика характеризується високою точністю визначення і простотою виконання [42].
З метою визначення сумарного вмісту амінокислот у сироватці крові був розроблений спектрофотометрический метод кількісної оцінки продукту реакції амінокислот з альдегідом ортофталевої. Продукт реакції в...
