олів (м'ясо, молочні продукти, риба та ін.), Часто обмежуються визначенням суми токоферолів. Коли в значних кількостях присутні інші токофероли (рослинні олії, зерно, хлібобулочні вироби, горіхи), для їх поділу використовують колоночную хроматографію.
. Для визначення суми токоферолів може бути використаний також флуоресцентний метод. Гексаново екстракти мають максимум флуоресценції в області 325 нм при довжині хвилі збуджуючого світла 292 нм.
. Для визначення індивідуальних токоферолів безсумнівний інтерес представляє метод ВЕРХ, що забезпечує в одному процесі як поділ, так і кількісний аналіз. Метод також характеризується високою чутливістю і точністю. Детектування проводять з поглинання або по флуоресценції.
2.2 Визначення кількісного вмісту вітамінів А і Е в морепродуктах
Визначення кількісного вмісту вітамінів А і Е проводилося на зразках чотирьох видів заморожених морепродуктів (креветка, восьминіг, кальмар, мідія) і трьох видах замороженої морської риби (минтай, путасу, камбала). Досліджували по п'ять паралельних зразків кожного об'єкта, в яких визначали вміст вітамінів А і Е.
Методика визначення кількісного вмісту вітамінів А і Е .
У центрифужні пробірки поміщається растертое м'ясо морепродукту (навішування 1 г), 1 мл спирту і 1 мл дистильованої води. Пробірки закривають кришками і перемішують вміст обережними струшуванні. Потім додають по 5 мл гексану і ще раз виробляють струшування. Потім центрифугують протягом 10 хвилин при 1500 об/хв.
Чітко отделившийся гексановий шар використовують для проведення вимірювань.
Визначення вмісту вітамінів А і Е проводили на аналізаторі «Флюорат».
Градуювання приладу «Флюорат» здійснювали шляхом вимірювання сигналів флуоресценції, приготовлених розчинів. Контроль стабільності градуювальної характеристики полягає в проведенні вимірювань концентрації вітамінів в декількох сумішах. Градуювання визнається стабільною, якщо отримане значення концентрації вітамінів в суміші відрізняється від відомого не більше, ніж на 10% в діапазоні 0,5 - 2,0 мг/дм 3 і 20% при більш низьких концентраціях. При невідповідності отриманих результатів зазначеним нормативам процес градуювання необхідно повторити.
В основу роботи приладу покладено флуоріметріческій метод вимірювання вмісту органічних і неорганічних речовин в області спектра 250-900 нм (наприклад, вітамін Е діапазон 300-320 нм). Для аналізу використовувалися кювети 10х20 мм. Під час роботи на «флюорат» необхідно вибрати з меню необхідну методику, потім виміряти фоновий сигнал, після встановити кювету з пробою і запустити процес вимірювання.
В якості світлофільтрів при вимірювання вітаміну Е застосовують світлофільтр збудження Е - 1 (292 нм) і світлофільтр реєстрації Е - 2 (320 нм). В якості світлофільтрів при аналізі вітаміну А використовують світлофільтр збудження А - 1 (335) нм) і світлофільтр реєстрації А - 2 (460 нм).
Цей метод визначення вмісту вітамінів був обраний у зв'язку з наявністю необхідного обладнання і простотою використання.
2.3 Визначення вмісту дієнових кон'югатів в морепродуктах
Крім того що про антиоксидантної активності морепродуктів можна судити за вмістом вітамінів А і Е так і за змістом дієнових кон'югатів.
До первинних продуктам перекисного окислення ліпідів відносяться циклічні ендоперекісі і аліфатичні моно- і гидроперекиси, так звані ліпопероксідов і дієнові кон'югати [25].
Визначення дієнових кон'югатів має значну перевагу для оцінки ПОЛ, оскільки відображає ранню стадію окислення. Звичайним субстратом для визначення дієнових кон'югатів виступає будь-яка речовина, що містить поліненасичені жирні кислоти.
Вільнорадикальне, або перекисне, окислення ліпідів (ПОЛ) являє собою самопідтримується ланцюгову реакцію, продукти якої в помірних кількостях необхідні для здійснення таких функцій організму, як оновлення біологічних мембран, фагоцитоз, регуляція артеріального тиску і т.д., але у великих - шкідливі, оскільки порушують структуру клітинних мембран [26].
При вільнорадикального окислення арахідонової кислоти відбувається відрив водню в б-положенні по відношенню до подвійного зв'язку, що призводить до переміщення цієї подвійної зв'язку з утворенням ДК [27].
Диєнові кон'югати ставляться до?? оксіческім метаболитам, які надають шкідливу дію на ліпопротеїди, білки, ферменти і нуклеїнові кислоти [28].
Визначення дієнових кон'югатів має значну перевагу для оцінки ПОЛ, оскільки відображає ранню стадію окислення....
