ний метод прямої спектрофотометрії, заснований на здатності цих сполук до виборчого светопоглощению на різних довжинах хвиль в УФ області спектра. Поглинання пропорційно концентрації речовини при вимірюванні на тих довжинах хвиль, де спостерігається властивий даному з'єднанню максимум абсорбції у використовуваному розчиннику. Метод - найбільш простий, швидкий, досить специфічний. Дає надійні результати при визначенні вітаміну А в об'єктах, що не містять домішок, що володіють поглинанням в тій же області спектра. При наявності таких домішок метод може бути використаний в поєднанні зі стадією хроматографічного розділення.
. Перспективним є флуоресцентний метод, заснований на здатності ретинолу флуоресцировать під дією УФ променів (довжина хвилі збуджуючого світла 330-360 нм). Максимум флуоресценції спостерігається в області 480 нм. Визначенню вітаміну А цим методом заважають каротиноїди і вітамін D. Для усунення заважає впливу використовують хроматографію на оксиді алюмінію. Недолік флуоресцентного методу - дорога апаратура.
. Раніше найбільш поширеним був колориметричний метод визначення вітаміну А по реакції з хлоридом сурми. Використовують розчин хлориду сурми в хлороформі (реактив Карр-Прайса). Механізм реакції точно не встановлений і припускають, що в реакцію вступає домішка SbCL5 в SbCl3. Образующееся реакції з'єднання забарвлене в синій колір. Вимірювання оптичної щільності проводять при довжині хвилі 620 нм протягом 3-5 секунд. Істотним недоліком методу є нестійкість розвивається забарвлення, а також висока гідролізуемих SbCl3. Передбачається, що реакція протікає таким чином:
Ця реакція для вітаміну А чи не специфічна, аналогічне фарбування дають каратиноїди, але хроматографічне розділення цих сполук дозволяє усунути їх заважає вплив.
Визначенню вітаміну А перерахованими методами, як правило, передує підготовча стадія, що включає лужний гідроліз жироподібних речовин і екстракцію неомиляемие залишку органічним розчинником. Часто доводиться проводити хроматографічне розділення екстракту.
. Останнім часом замість колонкової хроматографії знаходить все більш широке застосування ВЕРХ, яка дозволяє розділити жиророзчинні вітаміни (A, D, E, K), зазвичай присутні одночасно в харчових продуктах, і кількісно їх визначити з великою точністю. ВЕРХ полегшує визначення різних форм вітамінів (вітамін А-спирт, його ізомери, ефіри ретинолу), що особливо необхідно при контролі за внесенням вітамінів в харчові продукти.
Методи визначення вмісту вітаміну Е в продуктах.
До групи речовин, що об'єднуються загальною назвою «вітамін Е» відносяться похідні токола і тріенола, що володіють біологічною активністю a-токоферолла. Крім a-токоферолла, відомо ще сім споріднених йому сполук, що володіють біологічною активністю. Всі вони можуть зустрічатися в продуктах. Отже, головна трудність при аналізі вітаміну Е полягає в тому, що в багатьох випадках доводиться розглядати групу сполук, що мають велике хімічне схожість, але одночасно розрізняються за біологічної активності, оцінити яку можна тільки біологічним методом. Це важко і дорого, тому фізико-хімічні методи майже повністю витіснили біологічні.
Основні стадії визначення вітаміну Е: підготовка зразка, лужний гідроліз (омилення), екстракція неомиляемие залишку органічним розчинником, відділення вітаміну Е від заважають аналізу речовин та розділення токоферолів за допомогою різних видів хроматографії, кількісне визначення. Токофероли дуже чутливі до окислення в лужному середовищі, тому омилення і ектсракцію проводять в атмосфері азоту і в присутності антиоксиданту (аскорбінової кислоти). При омиленні можуть руйнуватися ненасичені форми (токотрієноли). Тому при необхідності визначення всіх форм вітаміну Е, що містяться в продукті, омилення замінюють іншими видами обробки, наприклад, кристалізацією при низьких температурах.
. Більшість фізико-хімічних методів визначення вітаміну Е засноване на використанні окисно-відновних властивостей токоферолів. Для визначення суми токоферолів у харчових продуктах найчастіше використовують реакцію відновлення тривалентного заліза в двовалентне токоферолами з утворенням забарвленого комплексу Fe (2+) з органічними реагентами. Найбільш часто використовують 2,2 - дипіридил, з яким Fe (2+) дає комплекс, забарвлений в червоний колір (лmax=500 нм). Реакція не специфічна. У неї також вступають каротини, стіроли, вітамін А та ін. Крім того, інтенсивність забарвлення істотно залежить від часу, температури, освітлення. Тому для підвищення точності аналізу токоферолли попередньо відокремлюють від сполук, що заважають визначенням, методом колонкової, газорідинної хроматографії, ВЕРХ. При визначенні Е-вітамінної цінності продуктів, в яких a-токоферол складає більше 80% загального змісту токофер...
