Звичайним субстратом для визначення дієнових кон'югатів виступає будь-яка речовина, що містить поліненасичені жирні кислоти.
Диєнові кон'югати володіють поглинанням в УФ-області (л=232 нм), коефіцієнт молярної екстинкції 2,2 € 10 5 см - 1? М - 1. Пробопідготовка для аналізу дієнових кон'югатів обов'язково включає в себе екстрагування ліпідів органічними розчинниками.
а) Екстракція дієнових кон'югатів із сироватки крові або тканини гептан-ізопропанольних сумішшю, з наступним виміром оптичної щільності в гептановой або ізопропанольних фазі (л=232-234 нм).
б) При аналізі з використанням ВЕРХ, встановлено, що дієнові кон'югати, що утворюються в організмі людини, в основному представлені ізомерами лінолевої кислоти, октодека - 9 цис -, транс - дієновий кислоти.
У даній роботі ступінь дієновий кон'югації ненасичених вищих жирних кислот визначали за методикою І.Д. Сталевий (1977).
Принцип. Процес пероксидного окислення поліненасичених жирних кислот супроводжується перегрупуванням подвійних зв'язків і виникненням системи зв'язаних дієнових структур, що мають максимум поглинання при 232-234 нм з плечем в області 260-280 нм, відповідним сполученим кетодіенам.
Реактиви:
) гептані
) ізопропанол
) етиловий спирт
Хід дослідження:
Для визначення дієнових кон'югатів 300 мг м'яса морської риби гомогенизировали з 3 мл суміші гептан: ізопропан у співвідношенні 1: 1 і центрифугували 10 хв при 6000 об/хв. До супернатанту додали 0,25 мл води. До 0,5 мл гептановой фази додали 2,5 мл етилового спирту. Оптичну щільність вимірюють при л=233 нм проти контролю (гептан: ізопропан 1: 1) [29].
У ході ПОЛ на стадії утворення вільних радикалів в молекулах НЖК виникає система пов'язаних подвійних зв'язків, що супроводжується появою нового максимуму в спектрі поглинання при 233 нм.
Розрахунок ДК виробляли за формулою:
ДК=Д233/(Е * с)
де Д233 - оптична щільність;
Е - коефіцієнт молярної екстинкції, 2,2 * 10 5 см - 1 * М - 1;
С - концентрація ліпідів, мг/мл.
Диєнові кон'югати виражали в мкмоль ДК/мг ліпідів.
3. Результати та обговорення
За вибраними методів визначення вітамінів А і Е та дієнових кон'югатів були проведені експерименти, в результаті яких представлені в малюнках.
Примітка * - Р lt; 0,05 в порівнянні з м'ясом восьминога
Малюнок 3.1 - Вміст вітаміну А в морепродуктах
Керуючись даними малюнка 3.1, досліджувані зразки морепродуктів можна розташувати в наступній послідовність, по збільшенню вмісту вітаміну А: восьминіг, кальмар, мідія, креветка. Вміст вітаміну А в м'ясі кальмара в 2,3 рази більше ніж у м'ясі восьминога, в м'ясі мідії вітаміну А міститься більше в 4,6 разів, а в м'ясі креветки в 6,9 разів більше.
Рисунок 3.2 - Вміст вітаміну А в морській рибі
За результатами дослідів на кількісний вміст вітаміну А в м'ясі морської риби видно що в досліджуваних зразках міститься практично однакову кількість вітаміну А (рис. 3.2).
Примітка * - Р lt; 0,05 в порівнянні з м'ясом восьминога
Малюнок 3.3 - Вміст вітамінів Е в морепродуктах
З досліджуваних зразків морепродуктів менше вітаміну Е міститься в м'ясі восьминога. У м'ясі мідії кількісний вміст вітаміну відрізняється незначно, в м'ясі креветки вітаміну більше в 1,5 рази, а м'ясо кальмара містить вітаміну Е більше ніж м'ясо восьминога в 2 рази (рис. 3.3).
Примітка * - Р lt; 0,05 в порівнянні з м'ясом минтая
Малюнок 3.4 - Вміст вітаміну Е в морській рибі
Найменша кількість вітаміну Е з досліджуваних зразків морської риби міститься в м'ясі минтая. Вміст вітаміну Е в м'ясі камбали і путасу відрізняється незначно, так вітаміну Е в м'ясі камбали міститься в 2,25 рази більше ніж у м'ясі минтая, а в м'ясі путасу вітаміну Е в 2,5 рази більше (рис. 3.4).
Примітка * - Р lt; 0,05 в порівнянні з м'ясом восьминога
Малюнок 3.5 - Вміст дієнових кон'югатів в морепродуктах
На малюнку 3.5 представлені результати дослідів по кількісному визначенню дієнових кон'югатів в морепродуктах. Найменше ДК міститься в м'ясі восьминога, а саме великий вміст в м'ясі мідії - в 9,6 рази більше ніж у м'ясі восьминога. М...
