щільності від концентрації, а потім будують калібрувальний графік, за допомогою якого виконують розрахунки.
Спектрофотометрія в УФ- і видимій областях - один з найбільш широко використовуваних фізико-хімічних методів у фармацевтичному аналізі.
Аналізовані ЛВ повинні мати в структурі молекули хромофорні групи (зв'язані зв'язку, ароматичне ядро ??та ін.), що обумовлюють різні електронні переходи в молекулах і поглинання електромагнітного випромінювання.
Крива залежності інтенсивності світлопоглинання від довжини хвилі (нм) називається спектром поглинання речовини і є його специфічною характеристикою. Вимірювання спектрів поглинання розчинів аналізованих речовин в ультрафіолетовій (190-380 нм) і видимої (380-780 нм) областях виробляють за допомогою спектрофотометрів різних марок (СФ - 26, СФ - 46 та ін.). Як розчинники використовують вільні від домішок воду, розчини кислот і лугів, етанол, хлороформ та інші органічні розчинники.
спектрофотометрическими константою є питомий показник поглинання (), який розраховують за формулою:
Питома показник поглинання являє собою величину оптичної щільності розчину, що містить 1,0 г речовини в 100 мл розчину, виміряну в кюветі з робочою довжиною 1 см. Встановивши за стандартним зразком величину і перетворивши цю формулу, можна розрахувати концентрацію аналізованого речовини з відносною похибкою до ± 2%.
Ідентифікацію ЛВ можна провести по Д 1 ^, характеру спектральних кривих у різних розчинниках, положенню максимуму і мінімуму светопоглощения або їх відношенню (при різних довжинах хвиль). Для кількісного спектрофотометричного аналізу важливий вибір аналітичної смуги поглинання. Остання повинна бути вільна від накладення смуг поглинання інших компонентів суміші і мати достатньо високий питомий показник поглинання аналізованого речовини.
фотоколориметрія відрізняється від спектрофотометрического аналізу тим, що аналізоване речовина за допомогою якого-небудь реагенту переводять (кількісно) в забарвлене з'єднання. Спочатку отримують забарвлені розчини, використовуючи розчини стандартних зразків (ДСО або PCO). Вимірювання оптичної щільності виробляють на фотоколориметрія. Потім будують калібрувальний графік залежності інтенсивності поглинання забарвлених розчинів від концентрації, за яким розраховують вміст JTB в випробовуваних зразках JIB або ЛФ.
Метод диференціальної спектрофотометрії і фотоколориметрії заснований на вимірюванні світлопоглинання аналізованого розчину щодо розчину порівняння, що містить певну кількість стандартного зразка випробуваного речовини або його замінника. Такий прийом призводить до зміни робочої області шкали приладу і зниження відносної похибки визначення до ± 0,5-1%, тобто порівнянної з тітріметріческі методами.
Похідна УФ-спектрофотометрія є одним з варіантів диференціальної спектрофотометрії. Якщо в диференціальної спектрофотометрії використовують різницю оптичної щільності при одній і тій же довжині хвилі, то в похідній - при двох довжинах хвиль, розділених невеликим інтервалом. Цей варіант заснований на виділенні індивідуальних смуг з УФ-спектру, який являє собою суму накладаються смуг поглинання або смуг, які не мають чітко вираженого максимуму. При цьому на спектральних кривих у координатах похідна-довжина хвилі з'являються смуги з чітко вираженими максимумами і мінімумами. Завдяки цьому можна ідентифікувати подібні за хімічною структурою речовини, підвищити вибірковість аналізу і виконувати кількісне визначення дво-, трикомпонентних сумішей більш економічно і ефективно, ніж тітріметріческі методами.
Одним з варіантів диференціальної спектрофотометрії є АЕ-метод. Він заснований на перетворенні одного з речовин, що входять до складу аналізованої проби, в таутомерну (чи іншу) форму, що відрізняється характером і інтенсивності світлопоглинання. Потім вимірюють светопоглощение розчину однієї таутомерні форми по відношенню до іншої, тобто використовують в якості стандарту розчин аналізованого речовини.
Спектрофотометрії в ІК-області. Природа смуг поглинання в ІЧ області пов'язана з коливальними переходами і зміною коливальних станів ядер, що входять в молекулу поглинаючої речовини. Тому поглинанням в ІК-області володіють молекули, дипольні моменти яких змінюються при порушенні коливальних рухів ядер. Область застосування ІЧ-спектроскопії аналогічна, але більш широка, ніж у УФ-методу. ПК-спектр однозначно характеризує всю структуру молекули, включаючи незначні її зміни. Важливі переваги ІЧ-спектроскопії - - висока специфічність, об'єктивність отриманих результатів, можливість аналізу речовин в кристалічному стані. Для вимірювання ІЧ-спектрів на однопроменевих або двулучевой ІЧ-спектрофотометрах використовують суспензії речовин у ва...
