великій їх кількості ідентифікація хімічно східних речовин утруднюється. У бібліотеку включають спектри речовин, відповідають пропонованим вимогам, справжність яких підтверджена іншими фармакпейнимі методами. Для обліку можливих варіацій властивостей кожного виду аналізованих об'єктів реєструють спектри кількох партій (серій). Реєстрацію спектрів проводять при дотриманні схожості умов вимірювань та первинної обробки, які попередньо оптимізовані для всіх аналізованих об'єктів і зберігаються постійними при наступних вимірах. У бібліотеку не включають спектри, які є випадковими викидами. Методи попередньої обробки спектрів. Рекомендується попередня обробка спектрів з метою підвищення інформативності одержуваних результатів і зменшення впливу спектральних варіацій. Обробка первинних даних може включати обчислення першою або другою похідною, векторну нормалізацію, мультипликативную корекцію розсіювання та інші методи, включаючи комбіновані. Слід враховувати, що математична обробка може призвести до втрати інформації або появи помилок-артефактів. Вибір математичної моделі і алгоритмів повинен бути обгрунтований.
Аналіз даних. Порівняння спектрів випробовуваних зразків при ідентифікації проводиться з індивідуальними або усередненими спектрами в бібліотеці, наприклад, шляхом кореляційного аналізу. Метод ідентифікації повинен бути валідована. Валідація методу ідентифікації покликана продемонструвати його придатність для передбаченого аналізу. Валідація методу передбачає перевірку показників специфічності і стійкості. Специфічність показує, що кожен об'єкт, спектр якого міститься в бібліотеці, буде позитивно ідентифікований і буде відрізнятися від інших об'єктів, при цьому об'єкти, не включені в бібліотеку, ідентифікуються негативно. Стійкість показує, що незначні зміни умов (наприклад, температура, вологість повітря, вібрації, температура зразка, ступінь ущільнення матеріалу, глибина занурення зонда, товщина шару і т. Д.) Не впливають на результати і надійність ідентифікації.
Кількісний аналіз.
Розробка методики (калібрування). При розробці методики для кількісного аналізу (калібрування), зміни інтенсивності поглинання або відбиття в спектрі корелюються зі змінами властивостей і/або складу речовин. При цьому реєструють спектри зразків з відомими значеннями їх хімічного складу та/або їх властивостей, підтвердженими іншими фармакопейними методами. Так як хемометріческіе алгоритми не допускають екстраполяції, необхідно, щоб область калібрувальних концентрацій була більше, ніж очікуваний діапазон аналізованих концентрацій або властивостей. Калібрувальні зразки, по можливості, повинні бути рівномірно розподілені всередині діапазону робочих концентрацій. Реєстрацію спектрів проводять при дотриманні параметрів експерименту, факторів, що впливають на результати вимірювань та первинної обробки, які попередньо оптимізовані для всіх аналізованих об'єктів і зберігаються постійними при наступних вимірах. У бібліотеку не включають спектри, які є випадковими викидами. Калібрувальну модель оптимізують за допомогою відповідного способу попередньої обробки спектрів, вибору спектральної області та математичного алгоритму.
Методи попередньої обробки спектрів. Проводять так само, як описано в розділі Ідентифікація raquo ;. Вибір математичної моделі і алгоритмів повинен бути обгрунтований.
Аналіз даних. Для калібрування може використовуватися будь обгрунтований математичний алгоритм. Так як в області ближнього ІЧ-діапазону спостерігається сильне перекривання смуг поглинання, кількісний аналіз проводять з реалізацією переважно хемометріческіх алгоритмів, наприклад таких, як метод приватних найменших квадратів (МЧНК, англ. PLS), методу регресії на головні компоненти (МРГК, англ. PCR ) та інших.
Валідація калібрувальної моделі. Валідація моделі калібрування передбачає демонстрацію її придатності для вирішення поставленого завдання. При цьому повинні бути оцінені такі показники, як специфічність (селективність), лінійність, робочий діапазон концентрацій (аналітична область), правильність, прецизійність і стійкість.
Для демонстрації специфічності існують такі підходи:
обраний спектральний діапазон або смуга поглинання пов'язана з аналізованих властивістю об'єкта (наприклад, концентрація, вміст вологи і т. д.) і корелює з фотометричної величиною;
демонструється, що зміни у складі плацебо в межах робочого діапазону концентрацій не роблять істотного впливу на результати кількісного виміру визначається зразка;
допускаються інші обгрунтовані підходи.
При валідації лінійності повинно бути показано, що результати, отримані методом БИК з реалізацією обраного алгоритму обробки, порівнянні з результатами, отриманими іншим стандартним методо...
