им киснем. Їх слід видаляти або пов'язувати в комплекс шляхом додавання Хелатуючий агента етилендіамінтетраоцтової кислоти. Положення максимуму поглинання залежить від рН і в кислих розчинах зміщується в область 245 нм. На підставі величини поглинання при цій довжині хвилі в розчині соляної кислоти і хлориду калію визначали вміст вітаміну С в безалкогольних напоях і деяких лікарських препаратах, де незначні домішки інших речовин. Часто буває бажано визначити в одному і тому ж розчині зміст дегидроаскорбиновой і L-аскорбінової кислот. Дегидроаскорбиновая кислота поглинає в УФ-області при 220 нм, але величина молярного коефіцієнта екстинкції значно нижче і становить 720. Таким чином, в цьому випадку чутливість спектрофотометрического аналізу майже в 20 разів менше, ніж у випадку L-аскорбінової кислоти. Пізніше ми побачимо, що цей факт має далекосяжні наслідки при хроматографічному поділі L-аскорбінової і дегидроаскорбиновой кислот.
Для того щоб подолати проблеми, пов'язані з присутністю в тваринних і рослинних тканинах речовин, поглинаючих в УФ-області, проводився пошук реагентів, що дають специфічні кольорові реакції з L-аскорбінової кислотою і (або) продуктами її окислення. Титриметричний метод з використанням діхлорфеноліндофенола, описаний вище, був адаптований для колориметрії. Для спектрофотометричного визначення можна використовувати і забарвлене 2,4-дінітрофенілгідразіновое похідне вітаміну. Виявлено, що це ж саме з'єднання утворюється з дегидроаскорбиновой і 2,3-дикетогулоновая кислотами, які є продуктами окислення L-аскорбінової кислоти (рис. 7.3). Ця реакція має широке практичне застосування для визначення вмісту дегидроаскорбиновой кислоти і відома під назвою методу Роу. Він полягає у взаємодії розчину дегидроаскорбиновой кислоти з 2,4-дінітрофенілгідразіном в специфічних умовах при 37 В° С протягом 4 год, в результаті чого утворюється Озазон - похідне 2,3-дикетогулоновая кислоти. Цю ж реакцію можна використовувати і для визначення вмісту L-аскорбінової кислоти, попередньо окислити її до дегидроаскорбиновой кислоти над активованим вугіллям (Норит) розчином брому і т. п. При додаванні до Озазон сильної кислоти утворюється розчин червоного кольору, поглинаючий при 530 нм.
В
Основу для колориметрического і спектрофотометричного методів аналізу створює також яскраво-синій колір продукту реакції L-аскорбінової кислоти із з'єднаннями диазония (рис. 7.4).
Альтернативний підхід полягає у використанні флуоресценції продукту конденсації дегидроаскорбиновой кислоти з о-фенілендіаміном. Опромінення утворюється хіноксаліна на довжині хвилі 350 нм призводить до його флуоресценції при 427 нм. Зазвичай методика включає окислення L-аскорбінової кислоти до дегидроаскорбиновой, і потім сумарна кількість визначається спектрофлуорометріческі.
4.5 Електрохімічні методи
Електрохімічні методи надають можливість високоселективного аналізу з високою...
