інічне обстеження пацієнтів складалося з збору скарг, анамнезу захворювання і життя, а також об'єктивного огляду з визначенням антропометричних показників.
Лабораторні тести включали в себе клінічний, біохімічний аналізи крові, аналізи сечі і калу. Всі лабораторні дослідження проводилися за стандартною методикою [80, 81].
2.3 Методика визначення варіабельності фенотипу N-ацетилтрансферази 2
Фенотип ацетиляторов встановлювали на основі визначення кліренсу сечової кислоти до і після прийому кофеїну в якості тестового препарату.
Кофеїн обраний як тестового препарату в силу схожості шляхів його метаболізму з сульфадимезином, яке складається в участі поліморфної N-ацетилтрансферази 2 як в ацетоілірованіі ізоніазиду, так і в ацетилюванні метаболітів кофеїну [82]. Отже, у пацієнтів з повільним і швидким типом ацетилювання мають місце цілком певні відмінності у співвідношенні деяких проміжних метаболітів кофеїну (5-ацетиламіно - 6-форміламіна - 3-метилурацилу і 1-метілксантіла), які використовуються в якості показників, що вказують на швидкість процесів ацетилювання . Кількісне визначення всіх метаболітів кофеїну в більшості випадків проводиться з використанням високоефективної рідинної хроматографії, що обмежує внаслідок недоступності і трудомісткості методу його застосування в практичній медицині. Однак ці відмінності цілком застосовні до кінцевого продукту метаболізму кофеїну - сечовий кислоті, визначення якої цілком доступно і не супроводжується суттєвими методичними труднощами [83].
За 24 години до обстеження з дієти випробовуваних виключалися продукти, що містять кофеїн (чай, кава, шоколад, какао, кофеїновмісні напої тощо). У день аналізу до прийому кофеїну визначали кліренс сечової кислоти, зіставляючи її концентрації, як у крові, так і в сечі.
Концентрації сечової кислоти в сечі і крові визначалися за допомогою набору реагентів для ферментативного фотометричногометоду виробника ТОВ «Аналіз Мед», РБ. Вимірювання проводили за допомогою фотометра автоматизованого РА 2600 («СОЛАР», РБ) і фотометра PV - 1251C («СОЛАР», РБ).
Принцип методу: визначення концентрації сечової кислоти відбувалося за допомогою взаємодії з уриказа. Утворений при цьому Н 2 О 2 реагував за участю каталізу пероксидази з N-етил-N-(2-гідрокси - 3-сульфопропіл) - 3-метиланилин натрієвої сіллю (TOOS) і 4-амінофеназоном (PAP) з утворенням виступаючого як індикатор червоно-фіолетового барвника.
Склад набору реагентів для ферментативного фотометричного визначення сечової кислоти представлені в таблиці 2.
Таблиця 2 - Склад набору реагентів для ферментативного фотометричного визначення сечової кислоти
Склад набораКонцентрація речовини 1. Буферний розчин Фосфатний буфер (pH 7,5) 100 ммоль/лTOOS1 ммоль / лАскорбат оксидаза>=1 кед / л 2. Ферментний реагент Фосфатний буфер (pH 7,5) 100 ммоль/л4-Амінофеназон0, 3 ммоль / лГексцаноферрат калію (II) 10 мкмоль / лПероксідаза>=1 кед / лУріказа>=0,1 кед / л 3. Стандартний розчин Сечова кіслота6 мг / дл (357 мкмоль / л)
Реагенти, одержувані в наборі, готові до застосування і могли відразу використовуватися на автоаналізаторе (методика R1-R2). Робочий реагент готувався допомогою змішування 4 частин буферног...
