них або сумнівних результатів.
Методи, в основі яких лежать імунологічні реакції
Дана група методів заснована на комплементарном взаємодії специфічного антигену (АГ) з антитілом (АТ) з подальшим проявом продукту флюорохромом або за допомогою кольорової біохімічної реакції.
При діагностиці урогенітального хламідіозу можна визначати в біологічному матеріалі або наявність родоспеціфіческому (групового) антигену (в сечі, виділеннях статевих органів, в матеріалі з соскоба), або специфічні антихламідійний антитіла - імуноглобуліни різних класів: А, М, G - в сироватці крові. Для цього використовують два основні методи: імуноферментний аналіз (ІФА) і реакцію імунофлюоресценції (РІФ).
A. ІФА
ІФА відомий давно і широко застосовується для діагностики у інфекційної патології. У Нині на ринку діагностичних тест-систем пропонується велика кількість наборів як зарубіжних, так і вітчизняних фірм-виробників. Методом ІФА визначають наявність і титр (або кількість) протівохламідійних антитіл - імуноглобулінів різних класів в сироватці крові обстежуваного. Хламідії мають слабку антигенної активністю, внаслідок чого вироблення і накопичення антитіл в організмі відбувається в малих кількостях. Кров для дослідження слід брати в період яскравих клінічних проявів переважно системного характеру. Сироватку, отриману після центрифугування, при необхідності можна зберігати при +4 - +8 В° С до 5 днів, або при -20 В° С 1 місяць. Рекомендується досліджувати парні сироватки для виявлення динаміки титру антитіл у процесі перебігу захворювання і проведеного лікування. Набори ІФА-методу містять у своєму складі позитивний і негативний контролі, за співвідношенням з якими судять про наявність або відсутності специфічних антитіл і їх кількості в сироватці крові обстежуваного. Методика постановки ІФА наводиться в інструкції до кожного конкретному набору і включає етапи:
1. Інкубація відповідного розведення сироватки крові обстежуваного на планшеті (Або з кулькою у пробірці) сенсибілізованим родоспеціфіческому хламидийним антигеном для взаємодії із ним специфічних протівохламідійних антитіл (Імуноглобулінів) - утворення комплексу антиген-антитіло (АГ - АТ);
2. Відмивання планшета (кульки) від непровзаімодействовавшіх імуноглобулінів;
3. Інкубація утворився комплексу АГ-АТ з антисироваткою до імуноглобулінів людини (загальним або якого-небудь певного класу, залежно від того - чи визначається просто факт наявності АТ до хламідій або наявність АТ, що відносяться до певного класу імуноглобулінів А, М, G), міченої ферментом;
4. Відмивання планшета (кульки) від непровзаімодействовавшіх мічених антитіл;
5. Проведення ферментативної біохімічної реакції в результаті якої утворюється кольоровий продукт. Інтенсивність забарвлення розчину відповідає кількості ферменту в реакційній суміші, отже кількістю утворилися комплексів АГ-АТ, число яких визначається змістом протівохламідійних антитіл у сироватці крові обстежуваного. Кількість пофарбованого продукту проміряють на рідері (спеціальний фотоколориметр).
У Останнім часом з'явилися ІФА тест-системи, в яких на 3 етапі використовують антитіла, мічені флюорохромами. У цьому випадку 5 етап не проводять, кількість антихламідійний антитіл визначають виміром світіння утворилися складних комплексів АГ-АТ-мічених АТ на рідері флюоріметре.
Деякі фірми пропонують ІФА тест-системи для виявлення хламідійного антигену в виділеннях, соскобах з урогенітального тракту та інших локусів (кон'юнктива, слизова прямої кишки та ін.) Біоматеріал беруть спеціальними зондами і поміщають в транспортну середовище для зберігання та попередньої обробки. Подальше проведення аналізу має ті ж етапи, як при дослідженні сироватки крові. Виявити хламідійний антиген ІФА методом вдається у 50-70% хворих. p> ІФА методи діагностики хламідійної інфекції отримують все більш широке поширення останнім часом. Але необхідно відзначити, що наявність протівохламідійних антитіл в сироватці крові свідчить про контакт організму з хламідіями. Виявити антихламідійний АТ вдається лише у 55 - 65% хворих, кількість хибнопозитивних результатів може становити 2 - 5%. Рівень антитіл залежить як від імунореактивності організму, так і від швидкості їх елімінації з організму. Тому постановка діагнозу хламідіозу по одиничного аналізу можлива лише за наявності високого титру протівохламідійних антитіл переважно IgМ класу. Найбільш коректно використовувати визначення рівня протівохламідійних АТ для оцінки динаміки перебігу захворювання та коректності проведеної терапії. Для цього проводять дослідження парних сироваток крові. Чотириразове і більше збільшення титру АТ свідчить про загостренні або прогресуванні захворювання. Зниження титру антитіл у процесі лікування свідчить про адекватність та ефективності проведених лікувальних заходів. Противохламидийной АТ можуть зберігатися в організмі після вилікування до року і більше.
ІФ...
