ом того, що MCM1 дійсно бере участь в деяких процесах ДНК, а так само може бути заміщена MCM 3.
Наші експерименти показали, що іммунопреціпітація MCM1 порівнянна з MCM 3 і GINS, і хоча вони не утворюють гетерогексамерного комплексу, припускають, що MCM1 бере участь у реплісоме або репарсоме і виконує деякі функції в клітинах Т. kodakarensis . Хоча західний блот-аналіз не зміг виявити MCM 2 у виписці з експоненціально зростаючої клітці T. kodakarensis , RT-PCR експеримент виявив наявність слідів гена MCM2 в клітинах. Рекомбінантний білок MCM 2 також має АТФази і гелікази діяльності в пробірці. Таким чином, ген MCM2 експресується в нормальних умовах зростання і може працювати в деяких процесах з швидкою віддачею. У майбутньому необхідні експерименти по вимірюванню ефективності транскрипції гена MCM2 на кількісної ПЛР, а також оцінка стабільності білка MCM2 в екстракті клітин.
фенотипическому аналіз дослідження чутливості? MCM1 і? MCM2 мутантних штамів на пошкодження ДНК, викликаними різними мутагенами, як повідомлялося для інших репарацій ДНК генів, пов'язаних в Т.kodakarensis , може дати ключ до з'ясування функції білків MCM. Methanococcus maripaludis S2 має області чотирьох MCM в своєму геномі, три з яких, здається, бути отримані з фага, спрямоване протеомічних дослідження виявило пептиди, що походять з трьох з чотирьох продуктів гена MCM. Крім того, чотири генних продукту спільної експресії в клітині E.coli спільно очищаються таким же фракціями. Ці результати дозволяють припустити, що кілька білків MCM є функціональними в клітинах М. maripaludis .
5. Комплектування MCM в області ORIC
Інше важливе питання - як MCM комплектується на розгорнутій області ORIC. Детальний механізм завантаження гелікази MCM не з'ясований. Вважається, що архебактерии використовують різні механізми збірки гелікази MCM в ORIC.
Аналіз набору в лабораторних умовах показав, що MCM у P. Furiosus комплектує ORIC ДНК Cdc6/Orc1-завісімим чином. Цей аналіз показав, що попередня завантаження Cdc6/Orc1 на ORB ДНК призводить до явного зниження комплектації MCM в регіоні ORIC, вважаючи, що вільні Cdc6/Orc1 переважніше в якості геліказного збирача, що сполучається із MCM і доводить його до ORIC. Було б цікаво зрозуміти, яким чином два завдання, ініціація розпізнавання і комплектування MCM, виконуються в білку Cdc6/Orc1, так як домен WH, який в першу чергу розпізнає і пов'язує ORB, також має сильне спорідненість до білка MCM.
Збірка білка MCM на ДНК ORB Уокер-мутанта P. furiosus в Cdc6/Orc1 сталася з тією ж ефективністю, що і в немутантів типах Cdc6/Orc1. У разі ДНК-зв'язування Cdc6/Orc1 у P. Furiosus має схожість в присутності і у відсутності АТФ, як і у випадку ініціації білків з Archaeoglobus fulgidus , С. solfataricus , А.
