tify"> Pernix . Так що до цих пір не відомо, чи є обов'язковим гідроліз АТФ, і чи регулює активність Cdc6/Orc1 набір білків MCM на ORIC в клітинах.
Ще однією важливою проблемою є дуже низька ефективність збірки білків MCM, про що стало відомо в лабораторних дослідженнях. Кількісна оцінка складання білка MCM в лабораторних умовах показала, що в ORB було зібрано менше одного гексамерів MCM. Стало відомо, що лінійні ДНК, що містять ORB1 і ORB2, використовувані у перевірці збірки, не можуть бути придатні для відновлення механізму реплікації ДНК у архей, і може знадобитися шаблон, який буде більш точно імітувати хромосомну ДНК.
Крім того, може виявитися, що ще не ідентифіковано білки, необхідні для досягнення ефективної збірки гелікази в клітинах P. furiosus в лабораторних умовах. Нарешті буде необхідно побудувати в лабораторних умовах більш визначену систему реплікації для аналізу регуляторних функцій Cdc6/Orc1 саме в процесі ініціації реплікації.
В М. thermautotrophicus білки Cdc6-2 можуть відділятися мультимера MCM. Cdc6-2 може знадобитися в якості вантажника MCM гелікази в організмі. Взаємодія між Cdc6/Orc1 і MCM, ймовірно, загальне для досліджуваних організмів. Проте, вплив Cdc6/Orc1 на активність гелікази MCM відрізняється у різних організмів, як описано вище. Деякі інші білкові фактори можуть діяти у різних архей, наприклад білок, віддалено пов'язаний з еукаріотичної Cdt1, який відіграє вирішальну роль під час комплектації MCM у еукаріот, існує у деяких архей, хоча його функції ще не були охарактеризовані.
6. GINS
еукаріотичний комплекс GINS був спочатку ідентифікований в Saccharomyces cerevisiae як суттєвий білковий фактор для ініціації реплікації ДНК. GINS складається з чотирьох різних білків, Sld5, Psf1, Psf2 і Psf3 (тому, GINS є акронімом від японського go-ichi-ni-san, тобто цифри 5-1-2-3 після цих чотирьох субодиниць). Збереження послідовності амінокислот з чотирьох субодиниць в комплексі GINS припускає, що вони є паралогію предкової форми. Тим не менше, більшість архейних геномів мають тільки один ген, що кодує цей білок, і, що більш цікаво, Crenarchaeota і Euryarchaeota (два основних роду архей) мають два гени з послідовностями, аналогічними Psf2 і Psf3 і Sld5 і Psf1, їх відповідно називають GINS23 і GINS51.
гомологів GINS, позначені як GINS23, був виявлений біохімічно в С. solfataricus як перший білок GINS в Архе, в процесі дріжджового двухгібрідного скринінгу взаємодії партнерів MCM білка і другий субодиниці, позначеної як GINS15, був ідентифікований мас-спектрометричним аналізом імуноафінного-очищеного нативного GINS з екстракту S. Solfataricus . У S. solfataricus GINS складається з двох білків, Gins23 і Gins15, і утворює тетрамерную структуру з молярним співвідношенням 2:2. GINS з P. furiosus, комплекс GINS23 і GINS51, із співвідношенням 2:2, був визначений в якості першого евріархейного комплексу GINS. Було віддано перевагу білку GINS51, тому що GINS15 не відповідав порядку ци...
