[4]. В
Рис.1. Різні механізми дії антисмислових олігонуклеотидів. br/>
РНКаза H-компетентні ODN можуть бути адресовані до будь-якого ділянці пре-мРНК і мРНК, так як їх дія заснована на активації РНКази H, субстратом якої є РНК у складі дуплексів РНК - ДНК. Однак багато хімічно модифіковані антисмислового олігонуклеотиди нездатні включати цей механізм через високу стерическую специфічності РНКази H. Це пов'язано з тим, що більшість модифікацій призводить до зміни параметрів спіралі дуплексу ODN - РНК, і вони перестають бути субстратами для РНКази H.
антисмислового олігонуклеотиди другого покоління - модифіковані по 2 -положенню залишку цукру, не є субстратами РНКази Н, тому потрібно шукати інші розщеплюють агенти (штучні РНКази). Ряд малих молекул (інтеркалятора, полікатіон) здатні розщеплювати РНК-мішень. Прикріплення до олігонуклеотидів реакційноздатних груп призводить до розщеплення бажаних ділянок РНК-мішені. Такі групи - це комплекси металів, аміни, олігопептиди і молекулярні конструкціями з групами активного центру нуклеаз (імідазольне кільце, COO - -, NH 2 -групи, гуанідин) [3-7].
1.2 Модифікації антисмислових олигонуклеотидов
1.2.1 Стратегії розвитку хімічних модифікацій олигонуклеотидов
На основі накопичених даних щодо застосування антисмислових олигонуклеотидов було сформульовано ряд критеріїв, яким повинен задовольняти ODN, щоб бути ефективним терапевтичним агентом [1,5,8,9]:
В· стійкість до нуклеазами
В· висока афінність до мішені
В· формування субстрату РНКази H
В· різні механізми дії (вплив альтернативний сплайсинг, арешт трансляції)
В· нетоксичність і специфічність
В· можливість неспецифічного зв'язування з білками для транспорту
В· легкість синтезу, патентабельность, вигода
Нативні ODN не здатні повністю задовольняти всім перерахованим критеріям. Основними обмеженнями виступають слабка нуклеазная стійкість і недостатньо стабільні комплекси ODN - РНК. Введення хімічних модифікацій в ODN по всіх або окремо взятим нуклеотидам дозволяють в значній мірі усунути наявні недоліки. Модифікації ODN проводять за фосфатної групі, залишку сахарози, азотисті основи або по кінцевим фосфатним залишкам. Для підвищення нуклеазной стійкості найчастіше проводять модифікацію по фосфатної групі і залишку дезок...
