анина), а потім вісіванням насіння на селективні середовіщі, или транзієнтна, путем вакуумної інфільтрації ДНК в листок.
ГЕНЕТИЧНОГО гармата, або балістічна трансформація: Маленькі золоті або вольфрамові частинки покріваються чужорідною ДНК и вістрілюються в молоді рослинні Клітини або ембріоні. Деяк генетичний материал залиша в клітінах и трансформує їх. Цей метод такоже дозволяє трансформацію рослинних органел - пластид. Ефективність трансформації нижчих, чем при трансформації помощью Agrobacterium, но більшість рослин могут буті трансформовані ЦІМ методом.
Електропорація: як і З бактеріямі, відчини в клітінах рослин робляться, вікорістовуючі електричний струм.
Вірусна трансформація: ГЕНЕТИЧНОГО материал упаковується у відповідному Рослін вірусі, а потім зміненій вірус вікорістовується для інфекції рослини. Геном більшості рослинних вірусів складаються з одно-ланцюжкової РНК, Який реплікується в цітоплазмі зараженої Клітини. Так цею метод є трансфекцією, а не реальною трансформацією, тому что вставлені гени Ніколи НЕ досягають ядра Клітини и не об'єднують з его геномом. Нащадки заражених рослин Вільні від вірусу та від вставленого гена [2, 3].
1.1.4 Тварини
Мікроін єкція: использование очень тонкої голки для ін єкції ДНК безпосередно в ядро ??ембріональніх клітін.
Вірусне превращение: Аналогічно випадка з Рослін, генетичний материал упаковується у вірусі, Який доставляє его до Клітини. На Відміну Від рослин, у тварин цею метод часто приводити до дійсної трансформації [3].
2. Трансформація рослинних клітін путем мікроін єкцій
Техніка мікроін єкцій, спочатку розроблено в 1970 р. для клітін тварин Грассманом и Дьякумакосом, в Сейчас годину стала методом для запровадження невеликих молекул, макромолекул (ДНК, РНК, білків), органел и вірусніх частінок в Різні тварінні Клітини. Методика заснован на вікорістанні скляних мікропіпеток з діаметром кінчіка 0,5-10 мкм, с помощью якіх здійснюють пряме перенесення макромолекул в цитоплазму або в ядро ??реціпієнтної Клітини. Останню іммобілізують на твердій підкладці, штучно пов язують з субстратом або закріплюють помощью піпеткі з присосками. Оскількі мікроін єкція ДНК віявілася Ефективний методом трансформації тваринності клітін, Різні досліднікі намагаліся Розробити подібні методи для трансформації клітін рослин. Однако з Рослін клітінамі це Довгий не вдавався. Успіх ціх експеріментів БУВ обумовлення Головним чином розробка таких методичних підходів, Які дозволяють локалізуваті ядра и орієнтуваті протопластах таким чином, щоб чужорідна ДНК могла буті введена безпосередно в ядра протопластів без помітного зниженя їх віжіваності. Нови Прийоми спріялі більш успішній внутрішньоядерній ін єкції І, Завдяк цьом, трансформації, что відтворюється.
Переваги та Недоліки техніки мікроін'єкцій для трансформації рослинних клітін.
Переваги: ??
Дуже Високі частоти трансформації (15-60%), І, таким чином, метод может буті корисний у тихий випадка, коли доступно только невелика Кількість клітін, протопластів або ОРГАНІВ;
Метод дозволяє вводіті макромолекул в цитоплазму або ядро;
Середня Кількість ін'єктованіх макромолекул на клітіну можна оцініті (примерно 0,1-1,0 мкл) i контролюваті;
Метод допускає найбільшу гнучкість у віборі типом и розміру молекул або органел, вікорістовуваніх як донора (например, ДНК, хромосоми, ядра, органели);
Біологічний ефект ін єктованого матеріалу можна оцініті в природному оточенні и спостерігаті после ін єкції;
Методика не требует обов язкового відалення клітінної стінкі І, таким чином, может використовуват у випадка тихий відів рослин, Які в Сейчас годину не вдається регенеруваті з колоній, отриманий на Основі протопластів. Це основна причина інтересу до мікроін єкцій.
Цілком імовірно, что в Майбутнього найбільшу Рамус буде прікуто до мікроін'єкції клітін, здатно до ембріогенезу, клітін пилку, ембріогенніх суспензійніх культур або ізольованих сім я-бруньок. Крім того, мішенню могут дива Клітини розвиваючий зачатків, пагонів або ембріогенніх тканин, ізольовані зародки и т.п.
Недоліки:
метод відносно дорого налагодіті и для его відтворення нужно вісококваліфікованій и досвідчений персонал. Процес повільній - Кваліфікований працівник здатно ін'єктуваті 20-100 клітін за день;
для ядерної трансформації чужорідної ДНК зазвічай Введення необходимо Здійснювати безпосередно в ядро ???? реціпієнтної Клітини. А введення мікропіпеткі может чинити шкідліву дію на реціпіентні Клітини;
