ви, де вона була розроблена, - Venereal Diseases Research Laboratory в Атланті. Антиген додають до інактивованої сироватці хворого, що поміщається на предметне скло, яке обертають протягом 4 - 5 хв при кімнатній температурі і відразу реєструють результат: наявність у сироватці реагинов викликає макроскопічно видиму флокуляцію. Реактоспособность сироватки в реакції VDRL виявляється приблизно через 4 тижні після зараження сифілісом. Кількісну оцінку циркулюючих антитіл отримують шляхом розведення сироватки перед постановкою реакції в геометричній прогресії: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16. Хибно позитивні результати можуть обумовлюватися аутоантителами при захворюваннях, що протікають з порушеннями імунітету (червоний вовчак, ревматизм, хвороба Шегрена, дісгаммаглобулінемія), а також при захворюваннях, пов'язаних з посиленим руйнуванням клітинних ядер (малярія, пситтакоз, вірусна пневмонія, карцинома).
Головними достоїнствами реакції VDRL є:
В· Низький вартість, легкість постановки,
В· швидке отримання результатів з досить високою чутливістю,
В· специфічністю, хоча й меншою, ніж в реакції з трепонемним антигеном.
D. Реакції імунофлюоресценції
Всі більшого значення набувають специфічні серологічні реакції РІФ і РІБТ.
Принцип РІФ заснований на виявленні флуоресцентних антитіл, так як мічені флюорохромом антитіла не втрачають здатності з'єднуватися з відповідним антигеном і тим самим обумовлюють світіння препаратів у синьо-фіолетових променях, джерелом яких є ртутно-кварцова лампа.
Відмінною рисою РІФ, порівняно зі стандартними серореакцій, є більш висока чутливість (тому вона буває позитивною у ряду хворих в первинному серонегативном періоді сифілісу) при збереженні високої специфічності. Однак, РИФ поступається по специфічності РИБТ, хоча з техніки постановки вона значно простіше.
Реакція ставиться в декількох модифікаціях: РИФ-ц, РІФ-200 і РІФ-АБС. Вважається, що РІФ-ц більш чутлива, а РИФ-200 і РІФ-АБС - більш специфічні. p> Реакція ставиться непрямим методом у 2 фази. У першій фазі реакції на антиген наноситься випробувана сироватка крові. Якщо в ній є відповідні антитіла, то утворюється комплекс антиген - антитіло. Для виявлення утворився комплексу проводиться друга фаза реакції, при якій його обробляють меченной флюорохромом імунної кролячої сироваткою (проти сироваткових глобулінів людини)
Отриманий у другій фазі комплекс антиген-антитіло визначається за допомогою люмінесцентної мікроскопії. Якщо світіння антигену немає, то це вказує на відсутність в випробуваної сироватці крові відповідних антигену антитіл.
Найбільш цінного модифікацією РІФ є РІФ-200, основним призначенням якої вважається рання серодіагностика сифілісу, а розпізнавання неспецифічних результатів КСР і серодіагностика інших форм сифілітичної інфекції, в тому числі і прихованого сифілісу. При встановленні вилікування сифілісу вирішальним є негативний результат РІФ-200. не володіє абсолютною специфічністю, тому питання про наявність або відсутність захворювання повинен вирішуватися на підставі сукупності клінічних, серологічних та інших даних.
Техніка постановки РІФ-200. З антигену готують препарати на тонких, знежирених предметних стеклах, на зворотному боці яких позначені гуртки діаметром 1 см. Антиген в межах гуртка, і висушений на повітрі мазок фіксують у протягом 5 хв у чистому ацетоні. Після фіксації скла поміщають у вологу камеру. Інактивовані випробовувані сироватки крові розводять у 200 разів ізотонічним розчином натрію хлориду. Для проведення першої фази реакції на поміщені у вологу камеру препарати наносять випробовувані сироватки. Після цього вологу камеру закривають і поміщають у термостат при +35 В° С на 30 хв. За закінчення цього часу препарати виймають з вологої камери, промивають у протягом 10 хв у двох порціях ізотонічного розчину натрію хлориду і перешкодять в штатив для висушування. Після висушування препарати знову вміщують у вологу камеру і наносять по краплі розведеної за титром флюоресцирующей сироватки проти глобулінів людини. Другу фазу реакції проводять при кімнатній температурі, після чого препарати 10 хв промивають у фізіологічному розчині натрію хлориду, висушують і монтують для люмінесцентної мікроскопії. Монтування препаратів полягає в тому, що на них скляною паличкою наносять маленькі краплі забуферованого гліцерину, накривають їх тонкими, знежиреними предметними стеклами, на які скляною паличкою наносять по краплі нелюмінесцірующіх іммерсійне масло. Дослідження препаратів виробляють в люмінесцентному мікроскопі. Ступінь світіння трепонем, що залежить від кількості антитіл в сироватці крові, позначається плюсами. Світіння вважається позитивним, якщо його оцінюють як 4 +, 3 + і 2 +.
E. Реакція імунофлюоресценції-абсорбції з БТ (FTA-ABS)
Використовуваний для реакції антиген являє собою суспензію блідих трепонем з уражених сифілісом яєчок кролика, фіксовану ацетоно...
