м на предметному склі. Можна також використовувати ліофілізовані блідітрепонеми після їх відновлення у фізіологічному розчині натрію хлориду. Інактивовану сироватку інкубують з сорбентом для абсорбування неспецифічних групових антитіл. Потім сироватку поміщають піпеткою на антиген, що знаходиться на предметному склі. Специфічні антитіла зв'язуються блідими трепонемами. Після промивання до трепонема на предметному склі додають комплекс антилюдського глобуліну з флюоресцентним барвником. Цей комплекс зв'язується з людським глобуліном на оболонці клітин блідих трепонем і може бути ідентифікований методом флюоресцентной мікроскопії. По закінченні не менше 2 год за ступенем флюоресценції сироватку можна класифікувати як нереактоспособную, прикордонну або реактоспособность. Реакція, що позначається двома плюсами або більше, свідчить про інфекцію.
Появи реактоспособность можна очікувати приблизно на початку 3-го тижня після зараження, а у нелікованих хворих вона виявляється постійно. Сироватка залишається реактоспособность і через кілька років після успішного лікування раннього сифіліс, а у хворих, які отримали адекватне лікування при пізньому сифілісі, - протягом десятиліть.
Головними достоїнствами реакції FTA-ABS є:
В· висока специфічність і чутливість,
В· швидко наступаюча реактоспособность.
Позитивна FTA-ABS може мати вирішальне значення для діагностики в сумнівних випадках, особливо при позитивних реакціях VDRL або автоматизованої реакції мікрогемагглютінаціі (Амна-ТР), що використовуються для скринінгу.
F. Реакція 19S IgM-FTA-ABS
При ідентифікації антитіл IgM до бліда трепонема реакцією FTA-ABS з використанням кон'югату анти-IgM в якості реагенту виявлялись хибнопозитивні і помилково негативні результати. Реакція 19S IgM-FTA-ABS в цьому відношенні є найбільш точним, специфічним методом. З метою відділення великих молекул 19S IgM від дрібніших молекул 7S IgM використовується методика ультрацентріфугірованія, адсорбування на білку А і гель-фільтрація з застосуванням ультрагеля аса 34 з трисбуфера при рН 8,0 на колонці До 26/100 при обсязі гелю 300 мл, швидкості потоку 27 мл/год і +24 0 С. У цій системі перший пік елюата містить фракцію 19S IgM. У процесі фільтрування відокремлюються неміцні імунні комплекси. Використання фракції 19S IgM в реакції FTA-ABS забезпечує високу специфічність, усуваючи можливість неспецифічних, помилкових результатів.
G. Реакція іммобілізації блідих трепонем (ІБТ)
Основне призначення - розпізнавання хибнопозитивних результатів при постановці стандартних серологічних реакцій. Це важливо у хворих з відсутністю клінічних проявів активного сифілісу чи маються ураження внутрішніх органів чи нервової системи. Роль в розпізнаванні хибнопозитивних результатів стандартних серологічних реакцій у вагітних.
Сутність реакції полягає у втраті рухливості блідими трепонемами у присутності иммобилизинов випробуваної сироватки та активного комплементу. Реакція ставиться в умовах анаеробіозу.
иммобилизинов з'являються в сироватці крові хворих пізніше, ніж інші антитіла, і, отже, РІБТ стає позитивною пізніше, ніж стандартні серореакции і РИФ.
Оцінка реакції:
В· при іммобілізації до 20% блідих трепонем реакція вважається негативною;
В· при іммобілізації від 21 до 50% блідих трепонем - слабоположітельной;
В· при іммобілізації від 51 до 100% - позитивною.
Позитивний результат РИБТ спостерігається у хворих з тропічними трепонематозов (пінта, беджель). Іноді РИБТ дає хибнопозитивний результат при саркоїдозі, еритематоз, туберкульозі, цирозі печінки, атеросклерозі і ін З віком пацієнтів число хибнопозитивних результатів РИБТ збільшується.
Спрощена методика РИБТ. Пробірки з сироватками розставляють у штативі. У журналі непарними номерами відзначають всі змішувачі, в які додавався активний комплемент (досвід), і парними номерами - куди додавався інактивований комплемент (контроль). Комплемент додають не для кожної сироватки окремо, а готують В«коктейльВ», тобто попередньо з'єднують комплемент з антигеном в потрібних співвідношеннях для всіх сироваток. Суспензія трепонем в живильному середовищі з розрахунку по 0,3 мл на кожну сироватку ділять на 2 частини і додають в один флакон активний комплемент, а в іншій - інактивований.
У стерильний змішувач для лейкоцитів набирають сироватку до мітки 1. Кінець змішувача стерильною ваткою витирають від сироватки, що залишилася на стінках. Т.к. при попаданні позитивної сироватки в антиген в наступних сироватках можуть бути отримані невірні результати. Щоб уникнути забруднення при великих постановках розливають антиген паралельно в два флакони. Після цього набирають суспензія трепонем з активним комплементом до мітки 2. В іншій змішувач набирають суспензія трепонем з інактивованих комплементом. Обидва кінці кожного змішувача закривають гумовим кільце...
