тотальної клітинної РНК, ПЛР з зворотного транскриптазою. Перевага зазначених методів є їх висока чутливість і специфічність. Білки-шаперони, які зв'язуються з ДНК в процесі переходу в НС, можуть перешкоджати виявленню НФ в ПЛР. p align="justify"> У водних об'єктах навколишнього середовища НФ можна виявити за допомогою флуоресціюючих моноклональних антитіл (МКА), що дозволяє визначити видову приналежність бактерій, але не інформативно щодо життєздатності клітин. Застосування магнітних сорбентів підвищує чутливість методу, а використання набору специфічних моноклональних антитіл до стабільних і лабільним епітопів липополисахарида дає можливість судити про потенційну життєздатності НФ. Перераховані методи дозволили виявити присутність НФ патогенних бактерій в організмі людини і тварин у продуктах харчування, в об'єктах навколишнього середовища: у воді в грунті. Експериментальні та гіпотетичні відомості про виявлення НФ в
довкіллю доповнюють роботи про індуктори НС і реверсії [3].
3. Переваги методу ПЛР (полімеразна ланцюгова реакція)
Серед усіх методів виявлення НФ бактерій, розроблених до теперішнього часу, особливо виділяється група молекулярно-генетичних методів, що володіють високою чутливістю, специфічністю і універсальністю. Молекулярно-генетичний метод на основі полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) в даний час є найбільш адекватним для виявлення НФ бактерій в об'єктах навколишнього середовища. Можливість вдосконалення і розвитку різних модифікацій ПЛР дозволяє вирішувати великий спектр наукових і прикладних завдань, пов'язаних з НФ бактерій. "Класичний" варіант ПЛР увазі якісну відповідь на питання про наявність в досліджуваному зразку ДНК виявляемого мікроорганізму. Це істотно обмежує його використання. Створення кількісного варіанту ПЛР дозволило б значно розширити можливості дослідження абіотичних факторів, що призводять до утворення НФ, молекулярно-генетичних основ цього процесу, а також вирішення ряду науково-прикладних задач, наприклад, при проведенні мікробіологічного моніторингу за збудниками у навколишньому середовищі і при лікуванні інфекційних захворювань людини. Тому завдання розробки молекулярно-генетичних методів, що володіють всіма достоїнствами ПЛР (чутливістю, специфічністю і універсальністю) і поєднують в собі кількісний аналіз, особливо актуальний при детекції НФ бактерій в навколишньому середовищі і контролі збудника при лікуванні інфекційних захворювань, є актуальною. p align="justify"> Вперше запропоновано методичний підхід на основі послідовних реакцій зворотної транскрипції і розробленого кількісного варіанту ПЛР для виявлення та докази життєздатності бактерій в НС. Метод виключає можливість індикації нежиттєздатних, мертвих клітин, що містять незруйнованими генетичний матеріал, так як маркером присутності і життєздатності бактерій в цьому випадку є короткоживущая специфічна моле...
