іх межнуклеотидной зв'язків. Ясно, що для подальшого конструювання рекомбінантних РНК такі фрагменти можуть виявитися непридатними. p align="justify"> Розщеплення РНК може проводитися і за участю нуклеаз, ковалентно пов'язаних з олігонуклеотидами. Ідея, що лежить в основі даного підходу до спрямованої фрагментації РНК, сходить до кінця 60-х років, коли Н.І. Гриньовою і її співробітниками був запропонований метод олигонуклеотид-спрямовується модифікації нуклеїнових кислот. Принцип цього методу полягає в тому, що з 5'-або 3'-кінцевим залишком олігонуклеотиду, комплементарного заданого району ДНК і РНК, пов'язують модифікує агент, який після утворення дуплекса атакує одне з найближчих до нього підстав. Реагентами цього типу вдалося направлено фрагментувати фенілаланіновой тРНК з дріжджів, РНК-компонент (M1 РНК) РНКази Р, а також 16S Хвороби E.coli. p align="justify"> Однак, як і у випадку РНКази Н, розщеплення РНК олигонуклеотид-Нуклеази часто проходить по декількох межнуклеотидной зв'язків, що дещо обмежує можливості застосування цього методу для отримання рекомбінантних РНК.
Для розщеплення РНК застосовують також рібозіми (природні РНК і синтетичні полірібонуклеотіди, здатні каталізувати цілий ряд перетворень у інших РНК). Перший Рибозим, що нагадує за своїми властивостями ендонуклеази рестрикції, був отриманий Т. Чеком. У науковій літературі його позначають як Рибозим L-19. Цей Рибозим являє собою РНК довжиною в 395 нуклеотидних залишків, в 5'-кінцевий області якої мається гексануклеотідная послідовність GGAGGG, відповідальна за специфічність розщеплення попередника 26S РНК при самосплайсінга. Ця послідовність комплементарна CUCUCU послідовності, розташованої на 3'-кінці першого екзонів ділянки попередника 26S РНК. Якщо цю РНК замінити інший, але обов'язково містить доступну для комплементарного зв'язування CUCUCUA послідовність, то Рибозим L-19 у присутності гуанозіна або гуанілова нуклеотидів з вільною 3'-гідроксильної групою розщепить її. p align="justify"> Джерелом необхідних ділянок РНК може служити такий спосіб, як синтез фрагментів РНК. Ферментативний синтез сегментів РНК здійснюють з використанням різноманітних генно-інженерних конструкцій. Проте в даний час в переважній більшості випадків для препаратівного отримання РНК використовуються РНК-полімерази, закодовані в геномах ряду ДНК-бактеріофагів (Т3, Т7 і SP6). Вони характеризуються дуже високою активністю і, на відміну від клітинних РНК-полімерази, складаються з однієї поліпептидного ланцюга. Важливо також те, що ініціація і термінация синтезу РНК цими полімеразами відбувається на одному певному нуклеотидном залишку. p align="justify"> Отримані одним із способів фрагменти нуклеїнових кислот надалі вбудовують у векторні молекули.
Підводячи підсумок викладеному, можна зробити висновок, що отримання генів протективних білків збудників являє собою досить складне завдання. Однак її р...
