ішення необхідно для створення в кінцевому рахунку рекомбінантних противірусних вакцинних препаратів. br/>
2. Вибір високоактивної і добре вивченою в імунологічному відношенні моделі вектора-носія і клонування відповідного гена
Отримання рекомбінантних ДНК
Суть конструювання рекомбінантних ДНК полягає у вбудовуванні фрагментів ДНК, серед яких знаходиться цікавить нас ділянка ДНК, в так звані векторні молекули ДНК (або просто вектори) - плазмідні або вірусні ДНК, які можуть бути перенесені в клітини про - або еукаріот і там автономно Реплі-царювати. На наступному етапі проводиться відбір тих клітин, які несуть в собі рекомбінантні ДНК (за допомогою маркерних ознак, якими володіє сам вектор), і потім індивідуальних клонів з цікавлять нас сегментом ДНК (використовуючи ознаки або проби, специфічні для даного гена або ділянки ДНК).
При вирішенні ряду наукових і біотехнологічних завдань конструювання рекомбінантних ДНК вимагає також створення систем, в яких забезпечується максимальна експресія клонують гена.
Існує три основних способи вбудовування чужорідної ДНК у векторні молекули. У першому випадку 3'-кінці фрагментів ДНК, серед яких знаходиться цікавить нас ділянка ДНК (ген або його сегмент, регуляторний район), за допомогою ферменту термінальної нуклеотіділтрансферази нарощуються гомополінуклеотідной послідовністю (наприклад, полі (Т)). 3'-кінці лінійної форми векторної ДНК тим же способом нарощуються комплементарної їй гомополінуклеотідной послідовністю (тобто полі (А)). Це дозволяє з'єднати дві молекули ДНК шляхом комплементарного спаровування штучно отриманих В«липкихВ» кінців. p align="justify"> У другому випадку В«липкіВ» кінці створюються за допомогою розщеплення молекул ДНК (як векторної, так і містить цікавить нас фрагмент) однією з ендонуклеаз рестрикції (рестриктаз). Рестриктази характеризуються виключно високою специфічністю. Вони В«дізнаютьсяВ» в ДНК послідовність з кількох нуклеотидних залишків і розщеплюють в них строго певні межнуклеотидной зв'язку. Тому навіть в ДНК великих розмірів рестриктази вносять обмежене число розривів. p align="justify"> Третій спосіб є комбінацією двох перших, коли липкі кінці ДНК, утворені рестриктазою, подовжуються синтетичними послідовностями.
Кінці фрагментів ДНК можна перетворити на В«липкіВ», нарощуючи їх двутяжевой олігонуклеотидами (В«лінкерамиВ»), до складу яких входить ділянка впізнавання рестриктазою. Обробка такого фрагмента даної рестриктазою робить його придатним для вбудовування в векторну молекулу ДНК, розщеплену тієї ж рестріктаеой. Часто як В«линкераВ» застосовуються полінуклеотидні фрагменти, які містять специфічні ділянки відразу для декількох рестріктаз (їх називають В«полілінкераміВ»). p align="justify"> Після вбудовування чужорідної ДНК у вектор їх ковалентное зшивання здійснюється ДНК-лігази. Якщо ...
