і до повного насичення. Утворений осад - міозин, через 5 хв відокремлюємо на центрифузі, а рідину декантіруем. Залишився на дні міозин розчиняємо в дістіліровной воді і проводимо якісну реакцію на наявність білків з біуретовим реактивом (фіолетовий колір).
Результати :
Отриману солерозчинних (в 10% розчині (NH 4) 2 SO 4) фракцію білків, в яку входять міозин, актин, тропомиозин. З однієї частини розчину було проведено осадження білків, додаючи насичений розчин (NH 4) 2 SO 4 до напівнасичення, з іншої частини - виділяли міозин, додаючи NaCl до насичення. Міозин розчинили в дист. воді, а фільтрат не містив білків (биуретовая реакція без фарбування).
3. Виділення щелочерастворімих білків:
Що залишився після екстракції водо- і солерозчинних білків осад переносимо в плоскодонну колбу і заливаємо 5 мл 10% -ого розчину NaOH і поміщаємо на 20 мл в киплячу водяну баню, отриманий розчин охолоджуємо і відфільтровує. До 3 мл фільтрату додаємо по краплях розчин 0,1 Н оцтової кислоти для нейтралізації лугу. Випав осад, який являє собою білки строми, через 5 хв відфільтровує. До фільтрату додаємо 1 мл біуретового реактиву, в результаті фільтрат набуває фіолетове забарвлення.
Результати :
Отриманий фільтрат являє собою білки строми. При биуретовой реакції забарвлення розчину придбала блідо-фіолетовий колір, тобто білки вдалося виділити не повністю, при додаванні оцтової кислоти, але при надлишку якої білки переходять в осад, а фіолетове забарвлення говорить про те, що у фільтраті присутні такі білки як альбуміни, які окрім води розчинні і в сольових розчинах кислот і лугів.
Отримані в ході експерименту дані заносимо в Таблицю 1.
Таблиця 1. Таблиця даних по експерименту фракціонування білків яловичого м'яса
Вихідний матеріалРастворітельРастворімий белокІз якого розчинника висаліваетсяБіуретовая реакціяМясо (яловичина) фільтра?? альбумінової фракції белковH2OМіоген, міоглобін, альбумін (NH4) 2SO4 + фільтрат глобулиновой фракції (NH4) 2SO4Міозін, актин, глобуліни (NH4) 2SO4 + (NH4) 2SO4МіозінNaCl + фільтрат, що містить білки стромиNaOHБелкі стромиCH3COOH +
II. Кількісне визначення білків
У даній роботі вміст білків визначалося спектрофотометричним методом Варбурга-Християна, який заснований на здатності ароматичних радикалів таких амінокислот, як тирозин, триптофан, фенілаланін, що містяться в білках, до светопоглощению при 280 нм. Однак при даній довжині хвилі дають поглинання і нуклеїнові кислоти (Abs max? 260 нм). Тому при визначенні масової частки білка, вимір оптичної щільності розчину виробляють при 260 і 280 нм, вносячи тим самим поправку на присутність нуклеїнових кислот і нуклеотидів.
Визначення масової частки білка:
Для аналізу брали 1 мл досліджуваного белоксодержащіх проби (вміст білка 0,05 ... 2 мг), потім додавали 9 мл 0,85% розчину хлориду натрію і знімали спектр отриманого розчину, за допомогою спектрофотометра Cary 50 ( базисна лінія була знята щодо 0,85% розчину NaCl). Масову частку білка (Б,%) визначаємо за формулою:
визначення масової частки міоглобіну:
Рис. 3. ЕСП для міоглобіну
Міоглобін, як зазначалося вище, відноситься до водорозчинних білкам; отриманий розчин міоглобіну має яскраво червоний колір. Наявність трьох максимумів поглинання: при 416 нм, 542 нм і 580 нм, вказує на те, що отримана білкова суміш містить міоглобін в окси формі (MbO 2).
Т.а. масова частка міоглобіну в м'язовій тканині следуемая яловичого м'яса:
визначення масової частки водорозчинних білків:
Рис. 4. ЕСП для водорозчинних білків
Висновок : в ході проведення даної лабораторної роботи була проведена екстракція, фракціонування і аналіз білків тваринного походження (зокрема білків м'ясо яловичого) по розчинності: за рахунок того, що альбуміни краще розчиняються у воді, вони осідають з насиченого розчину (NH 4) 2 SO 4, у свою чергу глобуліни осаджуються вже при досягненні напівнасичення (NH 4) 2 SO 4. Міозин виділяли з насиченого розчину NaCl, а білки строми осідають при нейтралізації лужного розчину оцтовою кислотою.
Освоєно спектрофотометрический метод кількісного визначення вмісту білків у м'ясі, в результаті якого вмісту білків в м'ясі яловичому склало%:
· міоглобіну: 0,27;
· водорозчинних: 0,002.
Список використаної літератури
1.Скуріхін І.М. Хімічний склад харчових продуктів. Кн.2: Довідко...
