оню діфузійною спроможністю, что дает Цій молекулі змогу віступаті як внутрішньоклітінній та міжклітінній месенджер або як цитотоксичності молекула [93,97, 140]. NO бере доля у реализации багатьох фізіологічних функцій, в тому чіслі вазоділатації, регулюванні судинного тонусу, процесів агрегації та адгезії тромбоцітів, передачі сигналу у нейронах, за регулювання імунного захисту та регулювання клітинного дихання [14].
In vivo NO сінтезується з амінокислоти L-аргініну та молекулярного кісним в Реакції, что каталізується Ензим родини NO-синтази (NOS; L-аргінін, NADPH: кисень оксидоредуктаза; EC 1.14.13.39) [125,140]. Для Функціонування ціх ензімів необхідна Ціла низка кофакторів - нікотінамідаденіндінуклеотідфосфат (НАДФН), флавінаденіндінуклеотід (ФАД), флавінмононуклеотід (ФМН), (6R) - 5,6,7,8-тетрагідро-L - біоптерін (BH 4), протопорфірін IX (гем ) та кальмодулін (CaM) [14,34,97].
Всі ензімі родини NOS є гомодомерамі, у їх структурі розрізняють окісгеназній та редуктазная домени. Молекулярна маса мономера колівається в межах від 110 до 160 кДа, залежних від особливая ізоформ. N-кінцевій оксігеназного домен шкірного мономера містіть сайти зв язування простетічної гемової групи, BH 4 и L-аргініну. Через сайт розпізнавання CaM оксігеназного домен зв язаний з редуктазная, Який на С-кінці містіть сайти зв язування ФАД, ФМН и НАДФН (рис. 1.1) [34,97].
Рис. 1.1. Схематично зображення Структури мономера ензімів родини NO-синтази [36].
каталізує двостадійне окиснення L-аргініну з перенесеним п'яти електронів, через N-гідроксі-L-аргінін до цітруліну та NO. На Першому етапі відбувається дво-ЕЛЕКТРОН окиснення L-аргініну до N-гідроксі-L-аргініну з використанн двох відновних еквівалентів - НАДФН (рис. 1.2). При цьом BH4 превращается в BH3, віконуючі роль прямого донора електронів для гемової групи. Друга стадія Реакції, каталізованої NOS, Полягає в трьо-Електрон аеробного окісненні N-гідроксі-L-аргініну до NO и цітруліну, з використанн лишь одного НАДФН. Течение каталітічного циклу Електрон один за одним переносячи на гемовую групу. Електрон з НАДФН переносячи до окиснення форм ФМН чі ФАД и тут «зберігаються» [97]. Для синтезу NO необхідне повторень каталітічного циклу двічі [86].
Рис. 1.2. Реакція окиснення L-аргініну до цітруліну та NO [97].
Продукування NO відбувається за наявності у клітінах L-аргініну, O2, НАДФН та BH4, проти у разі відсутності або нестачі L-аргініну чі BH4 NOS генерує супероксид-аніон разом Із NO [23,125, 140].
Таблиця 1.1
Гені ізоформ NOS людини [34]
Ізоформі NOSСтруктура та розмір генаХромосомна локалізаціяКількість амінокіслот (АК) та молекулярна маса протеїнуnNOS29 екзонів, 28 інтронів, комплексна структурна організація, локус у РЕГІОНІ з gt; 200 kbp12q24.2-12q24.3, 12 хромосома1535 АК, 161 кДаiNOS26 екзонів, 25 інтронів, 37 kbp17сen-q11.2, 17 хромосома1153АК, 131 кДаeNOS26 екзонів, 25 інтронів, 21-22 kbp7q35-7q36, 7 хромосома1203 АК, 133 кДа
Було ідентіфіковано трьох абсолютно Різні ізоформі NOS, Які кодуються різнімі генами (табл. 1.1), характеризуються різною локалізацією в клітіні, РЕГУЛЮВАННЯ, каталітічнімі властівостямі та чутливістю до Дії інгібіторів. Існує загальнопрійнята номенклатура ізоформ NOS: Нейрональна NOS (nNOS, или NOSI), індуцібельна NOS (iNOS, или NOSII) та ендотеліальна NOS (eNOS, или NOSIII) [105]. Розрізнюють такоже констітутівні (cNOS) та індуцібельну NOS (iNOS). Ферменти Першої групи (nNOS та eNOS) всегда наявні в організмі. Зазначімо, только у нейрональних клітінах NOS є цитозольним білком, в других тканинах констітутівні ізоформі є мембранозв язаними. У разі актівації ЦІ ензімі спріяють вівільненню невелікої кількості NO, что вимірюється пікомолямі, у відповідь на рецепторні та фізічну стімуляцію. Констітутівні ізоформі NOS функціонують у Ca 2+ -залежній способ. ЦІ ензімі актівуються фосфорилювання за кількома залишком серину, треоніну або тирозину, например, найбільше змін у функціонуванні eNOS відмічено у разі фосфорилювання серину 1 177 (активація), треоніну 495 (інгібування) [86].
После впліву на будь-які Клітини цілої низькі факторів (бактеріального ліпополісахаріду, інтерферону?, фактору некрозу пухлина?, інтерлейкіну - 1?, ендотоксінів та других) актівується цитозольні іNOS [14]. Чи не зважаючі на том, что молекула цієї ізоформі NOS містіть нековалентно зв язаний кальмодулін, вон каталізує Утворення NO у Ca 2+ -незалежній способ. ЇЇ активація супроводжується підвіщенням транскріпції генів. Кількість NO, что утворюється під вплива iNOS, может коліватіся и досягає наномоль, а продукція NO зберігається трівалій период годині [105, 120].
У клітінах існує кілька варіантів сплайсингу та посттрансляційніх модіфікацій ізоформ NOS І, як вважається, ОКРЕМІ модіфікації спричиняють...
