Якщо промивати колонку розчинником, то можна домогтися вимивання компонентів з колонки в такому порядку:
1. У 2 Розчинник 2А
Рідина, яка випливає з колонки - елюент.
Процес хроматографічного аналізу складається з 2-х стадій:
1. Підготовка колонки
2. Отримання хроматограми
Сутність рідинної хроматографії полягає в тому, що речовини, що розділяються переміщуються через шар сорбенту (НФ) разом з рухомою фазою з різною швидкістю внаслідок різної сорбіруємості.
У класичному варіанті рідинної хроматографії через хроматографическую колонку, заповнену сорбентом (НФ) пропускають елюент (ПФ).
Елюент - Рідина рухається під впливом сили тяжіння, швидкість руху елюенту можна регулювати.
Пробу аналізованої суміші поміщають у верхню частину колонки, у міру просування проби по колонці відбувається розділення компонентів і через певні проміжки часу відбирають фракції елюенту, які піддають аналізу з метою визначення концентрацій аналізованих компонентів.
Апаратура, застосовувана в класичній рідинної колонкової хроматографії постійно модернізується, вдосконалюється.
З початку 70-х років отримала розвиток сучасна високоефективна рідинна хроматографія (ВЕРХ) - швидкісна, хроматографія високого тиску. p> Поява цього методу було обумовлено необхідністю проведення аналізу висококиплячих (> 400 Вє С) або нестійких сполук, які не розділяються методами газової хроматографії, а також з метою збільшення швидкості та ефективності поділу.
Для здійснення цього застосовують колонки з малим внутрішнім діаметром (2-6 мм), зменшили діаметр часток сорбенту (5-50 мкм), що призвело до необхідності збільшити тиск на вході колонки до 0,5-40 МПа. Випускаються промисловістю рідинні хроматографи забезпечені високочутливими детекторами, дозволяють визначити до 10 -9 - 10 -10 г речовини.
Досить висока швидкість аналізу, низька межа виявлення, висока ефективність колонки, можливість визначити будь-які речовини (крім газів) призвели до швидкого розвитку високоефективної рідинної хроматографії (ВЕРХ). p> У високоефективної рідинної хроматографії реалізують всі механізми поділу - адсорбція, розподіл, іонний обмін та ін, але незалежно від механізму поділу рухомою фазою (ПФ) є рідина.
У рідинної хроматографії застосовуються хроматографічні параметри - t R , V R (час утримування і утримуваний об'єм).
Принципова схема рідинного хроматографа. p> Основні вузли
Елюент в колонку подається за певною програмою, склад і швидкість подачі елюетна може змінюватися залежно від умов аналізу. Для забезпечення високої швидкості аналізу установка рідинної хроматографії забезпечена двома насосами (3, 4), які управляються мікропроцесором (5) і можуть створювати тиск до 40 МПа. Проба вводиться в потік елюенту через спеціальний пристрій дозатор (Інжектор) - (7). Після проходження через хроматографическую колонку (8) речовини детектуються високочутливим детектором (9), сигнал якого реєструється і обробляється мікро-ЕОМ (11). Можна зареєструвати параметри t R і V R на стрічці самописця або автоматично відібрати фракції в момент виходу піків, щоб провести аналіз цих фракцій, використовуючи будь-які методи аналізу.
Колонка ЖХ
Колонка в рідинної хроматографії являє собою трубку з нержавіючої сталі з внутрішнім діаметром 2-6 мм і довжиною 10-25 см, відполіровану всередині. Колонка заповнюється частинками сорбенту розміром 3,5-10 мкм, зазвичай сферичної форми. Зазвичай використовують суспензію в спеціально підібраному розчиннику під тиском 50-80 МПа, такі колонки мають високу розділяє здатністю. p> Детектори
У Як детектори в рідинної хроматографії зазвичай використовують високочутливі спектрофотометри, які дозволяють виявити визначаються компоненти в кількостях до 10 -10 М, поглинають світло в УФ або видимій частині спектру (у межах 190-800 нм). p> У сучасних системах застосовують високочутливі спектрофотометри, які здатні реєструвати спектр протягом 0,01-0,05 с, що дуже важливо при якісної ідентифікації сполук.
При аналізі сполук, здатних окислюватися або відновлюватися застосовують електрохімічний детектор, іноді застосовують флуоресцентні детектори та детектори по електропровідності, які найчастіше застосовують у іонообмінної хроматографії.
Нерухомі фази (НФ)
Нерухомі фази (НФ), застосовувані в рідинної хроматографії не повинні змішуватися з рухомою фазою, повинні бути механічно і хімічно стійкі в умовах аналізу, забезпечувати необхідну селективність і ефективність.
У Як такі застосовують силікагель, оксид алюмінію і ін
Силікагель - (Гель кремнієвої кислоти SiO 2 В· xH 2 O) - одна із широко використовуваних НФ, специфічний сорбент. p> Адсорбція на силікагелі відбувається внаслідок утворення водневих зв'язків адсорбируемого речовини з поверхн...
