ЛР). Перші повідомлення щодо практичного застосування ПЛР з'явилися в 1985 г і з тих пір кількість публікацій, де ПЛР використовується в якості одного з методів дослідження, займає одне з перших місць у світовій науковій літературі. Ці підходи застосовні для виявлення і дослідження геномів інфекційних агентів, виявлення маркерів онкологічних захворювань, виявлення генетичних змін в геномі людини, пов'язаних з тими чи іншими функціональними порушеннями. На відміну від ІФА, ПЛР-аналіз належить до прямих методів виявлення збудника в клінічному матеріалі, що дозволяє оцінити активність вірусного процесу і простежити процеси поширення збудника в різних органах і тканинах.
Серодиагностика вірусного гепатиту В.
Вірус гепатиту В (hepatitis B virus, HBV) відноситься до сімейства Hepadnoviridae. Геном вірусу представлений частково здвоєною кільцевою молекулою ДНК розміром 3200 п.н. При світловій мікроскопії HBV виглядає сферичної часткою діаметром 42 нм (частка Дейна), що складається з ядра - нуклеоида, що має форму ікосаедра діаметром 28 нм, всередині якого знаходиться двуцепочечную ДНК, кінцевий білок і фермент ДНК-полімераза. До складу нуклеоідного білка входять HBcAg і HBeAg. Зовнішня оболонка (товщиною 7 нм) утворена поверхневим антигеном HBV - HBsAg (рис. 2, 3). Вірус гепатиту В є псевдоретровірусом, т. Е. Його ДНК може частково вбудовуватися в геном гепатоцитів. При ОВГ і загостренні ХГ вірусні частинки можна виявити в гепатоцитах і сироватці крові хворого. При інтегративної формі ХГ В і в стадії ремісії HBV в сироватці крові не виявляется.Основой лабораторної діагностики інфекції HBV є визначення серологічних маркерів інфікування вірусом: HBsAg, HВeAg, анти-НВс класу IgM і IgG, анти-НВе і анти-HBs, HBV ДНК та активності вірусної ДНК - полімерази. Залежно від перебігу вірусного гепатиту В спектр зміни серологічних маркерів виглядає по-різному - основний маркер інфікування HBV. При гострому вірусному Вв більшості випадків (90-80%) HBsAg вдається виявити в інкубаційному періоді, починаючи з 3-5-го тижня зараження. Середня тривалість циркуляції антигена - 70-80 днів. Швидке зникнення HBsAg (у перші дні жовтяниці) з появою антіНВs - поганий прогностичний ознака. При хронічному гепатиті ВHBsAg може циркулювати в крові хворого на протязі багатьох років. Слід зазначити, що застосовуються в даний час методи визначення HBsAg, у тому числі ІФА, мають поріг чутливості. Тому за наявності клінічних ознак гепатиту та відсутності HBsAg в сироватці крові необхідно досліджувати інші маркери інфекції HBV. Наявність HBsAg в крові свідчить про присутність вірусу в печінці і з великою часткою ймовірності в крові. Не всяка сироватка, що містить HВsAg, містить вірус гепатиту В. У ряді випадків ДНК вірусу вбудовується в ДНК гепатоцита не повністю, а частково, тільки тією ділянкою, який кодує синтез HBsAg. У цих випадках синтезуються HBsAg без інших компонентів віріона, (тобто без інших антигенів). Вважають, що така ситуація виникає при здоровому носійстві HBsAg.HBeAg вірусу гепатиту В характеризує високу інфекційність крові, будучи показником активної реплікації HBV. HBeAg циркулює в крові хворого тільки в присутності HBsAg. У перший тиждень жовтяничного періоду він виявляється у 85-95% хворих. Виявлення HBeAg протягом двох і більше місяців служить прогностичним ознакою розвитку хронічного гепатиту. У більшості хворих на хронічний гепатит з високою активністю процесу HBeAg зберігається на тривалий термін (до декількох років) .Антітела до ядерного антигену вірусу гепатиту В класу M (анти-НВcIgM) - маркер активної реплікації НВV і гострої інфекції. Виявляються через 1-2 тижні після виявлення HBsAg і зберігаються протягом 2-18 місяців. У 4-20% хворих на гострий гепатит В анти-HBcIgM є єдиним маркером інфекції. При ХГ В анти-НВсIgM можуть бути виявлені у деяких хворих в менших титрах, ніж при гострій інфекції, причому титр антитіл відображає тяжкість гепатиту. Антитіла до HBcAg класу G (анти-НВсIgG) з'являються практично одночасно з анти-НВсIgM. Як првило, вони залишаються у всіх осіб, що перехворіли гепатитом В, довічно. У 95% носіїв HBsAg поряд з HBsAg циркулюють і анти-НВсIgG. Антитіла до HBsAg (анти-НВs) свідчать про раніше перенесеної інфекції або про наявність поствакцинального імунітету (захисний рівень - 10 МО/мл). Вони з'являються в період одужання, через 4 тижні після зникнення HBsAg, досягаючи максимальної концентрації через 1-2 роки, з подальшим поступовим зниженням рівня, недоступного виявленню сучасними методами діагностики. У деяких випадках анти-HВs можуть циркулювати довічно. Поява анти-HBs на тлі клінічного поліпшення у хворого гепатитом В є гарним прогностичною ознакою. Важливо відзначити, що в динаміці гострої інфекції HBV мається вікно raquo ;, коли HBsAg вже не визначається, а анти-HBs ще не з'явилися. При цьому виявляються анти-HBcIgM і IgG. З цього випливає висновок про необхідність обстеження хворих ОВГ на анти-HBcIgM ...
