м, як для транспортування крові, взятої для клінічного дослідження, і струшують для змішування. Щоб уникнути можливого впливу деяких сортів гуми місця її зіткнення зі змішувачем слід змащувати вазеліновою олією. Можна не закривати кінці змішувача гумовими кільцями, а заливати їх парафіном з температурою плавлення вище 50 В° С. Завдяки того, що обидва кінці змішувача закриті, припиняється доступ повітря, суспензія трепонем знаходиться у відносно анаеробних умовах.
Для контролю набирають у ті ж змішувачі все суспензії з активним і інактивованих комплементом, а також одну суспензія без комплементу. Ставлять реакцію іммобілізації з сироватками, завідомо негативними і завідомо позитивними, що залишилися від минулої постановки.
Заповнені і закриті змішувачі поміщають в спеціальний штатив. На кожен змішувач надягають нумеровані кільця з картону. Змішувачі поміщають у термостат при +35 В° С на 18-20 ч. Для реєстрації досвіду через 18 год змішувачі виймають з термостата попарно - досвід і контроль.
Підрахунок рухомих і нерухомих трепонем. За кількістю змішувачів у штативі розставляють і нумерують пробірки. Вміст змішувача виливають у відповідну цифрову пробірку, перемішують тим же змішувачем з одягненою на нього піпеткою і наносять краплю суспензії з активним комплементом на ліву сторону предметного скла, а на праву сторону - з інактивованих комплементом тієї ж сироватки; посередині скла ставлять номер сироватки. Краплі накривають покривними стеклами. Краплі повинні бути невеликими, інакше трепонеми В«ПливутьВ» з струмом рідини, і тоді судження про їх рухливості і підрахунок скрутні. Облік результатів реакції починають з інактивованого комплементу. Підраховують 25 - 30 трепонем і відзначають, яка кількість серед них рухомих і яке - нерухомих. Якщо у контролі міститься менше 17 рухомих трепонем з 25 полічених, то такий досвід непридатний і його слід повторити. У пробірках з інактивованих комплементом відсутність рухливості трепонем пояснюється не іммобілізацією, а токсичністю сироватки або недостатньо високим якістю середовища збереження.
При визначенні рухливості трепонем слід врахувати, що рухи трепонем різні. Вони можуть мати вельми активної рухливістю, особливо виразні згинальні руху, а іноді відзначаються тільки гвинтові руху. Іноді трепонема лежить як би нерухомо, але якщо придивитися, то видно, що через деякий час вона починає активно рухатися. Слід також вміти відрізняти активні рухи трепонеми від руху з струмом рідини.
У пробірках, в які вилили вміст змішувачів, надалі визначають залишковий комплемент (всі пробірках досвіду і контролю). Пробірки з інактивованим комплементом служать як би контролем для порівняння сталося гемолізу.
Розрахунок специфічної іммобілізації виробляють за такою формулою:
(Число рухливих трепонем у контролі - число рухомих трепонем в досвіді)/Число рухливих трепонем у контролі * 100.
Реакція іммобілізації вважається позитивною, коли% іммобілізації вище 51; від 31 до 50% - слабоположітельной; сумнівною - від 21 до 30% і негативною - нижче 20%. p> Досвід з сумнівними, а іноді і слабоположітельнимі результатами слід повторить; при цьому можна отримати або позитивний, або негативний результат. Незадовільним вважається результат, якщо є велика бактеріальне забруднення або відзначається токсичність сироватки. Такі дослідження слід повторити з новою порцією сироватки. Доцільно також піддавати повторному дослідженню всі сироватки, що дали повне розбіжність із стандартними серологічними реакціями. Ці сироватки заслуговують особливої вЂ‹вЂ‹уваги, так як в таких випадках результати РИБТ можуть дати опору для судження про наявність або відсутності сифілісу.
При постановці досвіду звертають увагу на дотримання стерильності і чистоти посуду. Вона повинна бути вільна від домішки речовин, що можуть зробити шкідливий вплив на життєздатність трепонем. Змішувачі та весь посуд миють спочатку холодною водою, потім гарячою, споліскують дистильованою водою, не застосовуючи ніяких дезінфікуючих засобів. Змішувачі стерилізують в автоклаві, підсушують в сушильній шафі.
H. Реакція імунної прилипання блідих трепонем (РІП)
Заснована на тому, що вірулентні тканинні трепонеми, сенсибілізовані сироваткою хворого сифілісом, у присутності комплементу і еритроцитів прилипають до поверхні еритроцитів і при центрифугировании захоплюються з ними в осад, зникаючи з надосадової рідини.
Для постановки реакції використовуються: випробувана сироватка, антиген, комплемент, еритроцити донора, ізотонічний розчин натрію хлориду. Кров беруть з вени і обробляють, як для реакції Вассермана. Сироватку крові інактивують в водяній бані при +55-56 В° С протягом 30 хв. В якості антигену використовують завись блідих трепонем штаму Нікольса.
Техніка постановки. Попередньо для реакції розводять всі інгредієнти. На дно центрифужной пробірки мікропіпеткою наливають 0,05 мл досліджуваної сироватки,...
