додають 0,35 мл суміші комплементу (0,05 мл) з антигеном (0,3 мл). Пробірки енергійно струшують протягом 30 сек. і залишають при кімнатній температурі на 30 хв; потім у всі пробірки додають по 0,1 мл суспензії еритроцитів, пробірки енергійно струшують протягом 30 сік. і залишають у термостаті при +37 В° С на 30 хв, після чого всі пробірки центрифугують при 1000 об/хв протягом 3 хв.
Облік результатів проводять шляхом підрахунку блідих трепонем в надосадової рідини. Для цього 0,01 мл надосадової рідини мікропіпеткою наносять на предметне скло, покривають покривним склом і в темному полі зору підраховують число блідих трепонем в 10 полях зору. При перегляді препарату під мікроскопом враховуються тільки ті блідітрепонеми, які можуть вільно переміщатися з струмом рідини. Ті ж трепонеми, які потрапили в поле зору з струмом рідини додатково, після початку підрахунку (В«приплилиВ»), в цьому полі зору вже не враховуються. Відсоток прилипання блідих трепонем обчислюється за формулою:
(100 - Про n )/K * 100,
де O n - число блідих трепонем в 10 полях зору з дослідної пробірки;
До - Число блідих трепонем в 10 полях зору з контрольної пробірки. p> При імунному прилипанні блідих трепонем, рівному 0 - 20%, результат розцінюється як негативний; 21 - 30% - сумнівний; 31 - 50% - слабопозитивний і при 51 - 100% - позитивний. p> У відповіді результат реакції виписується без вказівки відсотка. У разі розбіжності результатів РІП з даними інших реакцій необхідно провести повторний облік результатів РІП із знов приготованим препаратом, повторити постановку реакції з цією ж сироваткою крові, при необхідності повторити РІП з сироваткою крові, взятої у обстежуваного повторно.
РІП слід застосовувати в наступних випадках: при діагностиці тих форм сифілісу, коли на підставі даних анамнезу, клініки, результатів КСР та інших досліджень не вдається підтвердити діагноз захворювання; при диференціюванні неспецифічних результатів КСР; при контрольному спостереженні після закінчення лікування. Специфічність і чутливість РІП близькі РИБТ і РИФ. h4> I. Реакція гемаглютинації з блідими трепонемами (ТРПГА)
Принцип методу полягає в наступному: формалінізірованних тонізувати баранячі еритроцити з'єднуються з екстрактом з патогенних блідих трепонем. Утворений комплекс, який фіксується на еритроцитах, становить корпускулярний антиген. При з'єднанні антигену з сироваткою, що містить гомологічні антитіла, утворюється імунний комплекс, який викликає аглютинацію еритроцитів.
Попередній результат може бути зареєстрований після інкубації протягом 3 - 4 ч. Поява рівномірної рожевого забарвлення вказує на позитивний результат, а агглютінати (преципітат) темно-червоного кольору у вигляді плями або кільця є показником осадження еритроцитів. ТРПГА-тест, що виконується вручну або автоматизованим методом, є специфічним і чутливим тестом.
J. Реакція мікрогемагглютінаціі з блідими трепонемами (МНА-ТР)
Є варіантом ТРПГА. Її ставлять на пластинках для мікротітрованія. Вона вимагає по порівняно з ТРПГА меншої кількості сироватки, адсорбуючого розріджувача та антигену. Остаточний результат отримують після 4 год інкубування сироватки. Автоматизована реакція мікрогемагглютінаціі з блідими трепонемами (Амна-ТР) завдяки автоматизації процесів заповнення тест-пластин і розведення сироватки простіше і обходиться дешевше, ніж реакція АМН-ТР. Придатна при масових обстеженнях на сифіліс.
Клінічна оцінка результатів серологічних реакцій
При первинному серонегативного періоді сифілісу бувають позитивними РИФ і реакція Колмера як найбільш чутливі серореакции. Однак це не є підставою для постановки таким хворим діагнозу первинного серопозитивного сифілісу. У ряду хворих у цьому періоді буває ізольований позитивний результат при постановці реакції Вассермана з Трепонемні або з кардіоліпіновим антигенами. В кінці 3-й або протягом 4-го тижня після появи первинної сифіломи стають позитивними стандартні серологічні реакції - з цього моменту починається первинний серопозитивний період сифілісу. На 1 - 2-му тижні первинного серопозитивного сифілісу відзначається збільшення ступеня позитивності серореакции (1 +, 2 +, 3 +) і наростання титру реагинов (1:5, 1:10, 1:20). РИФ і реакція Колмера у всіх хворих дають різко позитивний результат, але ІБТ негативна або відсоток іммобілізації дуже низький. Діагноз первинного серопозитивного сифілісу ставиться тим хворим, у яких осадові реакції і реакція Вассермана з неспецифічними антигенами дали одноразовий слабопозитивний результат. При подальшому перебігу первинного сифілісу всі серологічні реакції стають різко позитивними (4 +); титр реагинов досягає 1:80, 1:160, РІФ продовжує бути різко позитивною, але ІБТ у більшості хворих ще залишається негативною або може стати слабоположітельной.
При вторинному свіжому сифілісі різко позитивний результат по всіх стандартних серологіч...
