> Хід визначення. Складають квадрат хроматографічного паперу вчетверо і роблять виріз в центрі його діаметром близько 1 см.
Квадрат хроматографічного паперу простим олівцем ділять на сектори, нумерують їх від 1 до 4, відступивши від центру вирізу на 1 см, і намічають олівцем у кожному секторі гуртки для нанесення проб. Поміщають квадрат на ніжку, зроблену з фільтрувального паперу у вигляді трубочки висотою 2 см і вставлену в центральний виріз. p align="justify"> Наносять мікропіпеткою в обведений гурток 1-го сектора 0,02 мл стандартного розчину фенілаланіну, потім підсушують пляму за допомогою вентилятора і на висушене місце наносять 0,02 мл плазми крові здорової людини; в гурток 2-го сектора наносять 0,02 мл плазми здорової людини і 3-й сектор - 0,02 мл плазми обстежуваного хворого пацієнта. Залишають папір на повітрі до повного висихання нанесених проб. p align="justify"> У чашку Петрі наливають розчинник, кладуть паперовий квадрат на краю чашки Петрі, при цьому кінець ніжки занурюється в розчинник. Закривають чашку кришкою і залишають при кімнатній температурі, поки фронт розчинника не досягає діаметра близько 5 см (позначку олівцем зробити заздалегідь). Після цього хроматограму висушують в сушильній шафі при 90-100? С, обприскують її розчином нингидрина і знову поміщають у сушильну шафу на 10 хв. p align="justify"> У негативних пробах (вміст фенілаланіну нижче 0,07 г/л) забарвлюється пляма нанесеною плазми і невелика навколишнє частину. Пляма зі стандартним розчином фенілаланіну (0,06 г/л) і плазмою здорової людини (0,01 г/л) містить в сумі 0,07 г/л фенілаланіну. Досліджувані зразки, що дають такий же або більший ореол, вважають позитивними. У пробах, взятих у хворих на фенілкетонурію, виявляється чіткий ореол діаметром близько 3,5 см.
Оформлення роботи. Замалювати отриману хроматограму, порівняти величину забарвлених зон в трьох секторах і зробити висновок щодо змін у хворого пацієнта. p align="justify"> б. Виявлення фенілпіровіноградной кислоти в сечі. Метод заснований на взаємодії енольної форми фенілпіровіноградной кислоти з хлоридом заліза FeCl3 з утворенням комплексної сполуки синьо-зеленого кольору. p align="justify"> Хід визначення. В одну пробірку наливають 0,5 мл сечі здорового, а в іншу - хворої людини, додають по 5 крапель розчину хлориду заліза (III) і спостерігають за появою фарбування. p align="justify"> Цю реакцію дають різні речовини, хоча забарвлення їх сполук з хлоридом заліза FeCl3 неоднакова. За наявності в сечі достатніх кількостей фенілпіровіноградной кислоти розвивається синьо-зелене або темно-зелене забарвлення, що зникає через 5-10 хв. Подібне фарбування може давати білірубін сечі. p align="justify"> в. Виявлення фенілпіровіноградной кислоти в сечі за допомогою набору В«Біофан ПВ». p align="justify"> Хід визначення. Індикаторну папірець змочити сечею і через 30 з порівняти забарвлення індикатора з кольоровою шкалою. p align="justify"> Оформлення роботи. Порівняти характер фарбування в нормальній і патологічній сечі, зробити висновок про передбачувану молекулярної хвороби і вказати причини. p align="justify"> Практичне значення роботи. У нормі вміст фенілаланіну в плазмі крові становить у дітей до 1 місяця 75-100 мкмоль/л (0,025-0,05 г/л) і від 2 місяців до 14 років 25-75 мкмоль/л. Із сечею його екскретується у дітей до року 6,0-24,0 і від року до 14 років 6,0-72,0 мкмоль/добу. Застосовувані проби на присутність фенілпіровіноградной кислоти в сечі здорової дитини негативні. p align="justify"> При фенілкетонурії вміст фенілаланіну в крові підвищується до 600-2400 мкмоль/л, а виділення з сечею становить до 3,0-12,0 мкмоль/добу. Проби на фенілпіровиноградну кислоту в сечі стають позитивними. Причому вміст її в добовій сечі становить 0,05-3,0 г або 0,3-18 ммоль. p align="justify"> При ураженнях печінки (вірусний гепатит, отруєння гепатотропними отрутами) порушується гідроксилювання фенілаланіну, який внаслідок трансамінування перетворюється на фенілпіровиноградну кислоту. Тому у таких хворих збільшується вміст фенілаланіну в сироватці крові і виділення фенілпіровіноградной кислоти з сечею відповідно тяжкості перебігу захворювання. p align="justify"> Робота 68. Діагностика тірозіноз пробій Миллона на тирозин і 4-гидроксифенилпировиноградную кислоту
тірозіноз пов'язаний з недоліком ферменту 4-гидроксифенилпируватдиоксигеназы, внаслідок чого гальмується перетворення 4-гидроксифенилпировиноградной кислоти і тирозину. При цьому зміст їх у біологічних рідинах збільшується. p align="justify"> Реактиви. Реактив Миллона *; L-тирозин, стандартні розчини 0,3; 0,4; 0,5; 0,6 г/л. p align="justify"> Обладнання. Смужки фільтрувального паперу 10х20 мм; очні піпетки. p align="justify"> Матеріал. Сеча, нормальна і патологічна. p align="justify"> Принцип методу див. роботу 1, м.
Хід визначення. На одну смужку фільтрувального паперу наносять 1 краплю сечі здорового, а на...
