билиногена в сечі
Реактиви. Реактив Ерліха *, насичений розчин натрію ацетату; хлороформ; бутиловий спирт; папір індикаторна для вимірювання рН (в інтервалі 4,0-5,0). p align="justify"> Обладнання. Піпетки на 5,0 і 10 мл; штатив із пробірками; центрифуга лабораторна з Центрифужна пробірками. p align="justify"> Матеріал. Сеча (піддається дослідженню протягом 2-3-х годин після сечовипускання). p align="justify"> Метод заснований на взаємодії порфобилиногена з п-диметиламінобензальдегідом з утворенням сполуки, пофарбованого в червоний колір.
Хід визначення. У пробірці змішують 2,5 мл реактиву Ерліха і 2,5 мл сечі. Додають 5 мл насиченого розчину ацетату натрію і перемішують скляній паличкою. Потім вимірюють рН індикаторним папером, значення рН має бути в інтервалі 4,5-5,0, якщо рН менше 4,0 додають розчин ацетату натрію для встановлення потрібного рН. Якщо забарвлення не утворюється - результат негативний. При утворенні рожевою або червоного забарвлення додають 5 мл хлороформу і струшують. Якщо забарвлення перетворюється на шар хлороформу, а верхній водний шар стає безбарвним або жовтим - результат негативний. При збереженні фарбування водної фази переносять 6-8 мл водного шару в іншу пробірку, додають бутиловий спирт у співвідношенні 2:1 і струшують. Зазвичай фази поділяються швидко, в іншому випадку суміш центрифугують. При переході забарвлення в бутиловий шар результат негативний, а якщо водна фаза залишається пофарбованої - результат позитивний для порфобилиногена. p align="justify"> Примітка. При зберіганні сечі понад 3-х годин при кімнатній температурі реакція може бути помилково негативні, що, мабуть, пов'язано з перетворенням порфобилиногена в порфіріни і утворенням інгібіторів реакції. Якщо немає можливості досліджувати сечу в перші 2-3 години, її зберігають у холодильнику при 4? С або в замороженому стані. При зберіганні в холодильнику і доведенні рН сечі до 6,0-7,0 порфобіліноген стабільний тривалий час. p align="justify"> Оформлення роботи. Відзначити характер розвинувся фарбування, зробити висновок про можливість практичного використання даного визначення. p align="justify"> Практичне значення роботи. У нормі порфобіліноген в сечі не виявляється (0,2 мг/л). Даним методом він виявляється при концентрації, що перевищує 6 мг/л) при різних формах печінкових Порфирій - гостра переміжна, копропротопорфірія, спадкова копропорфірія). br/>
Робота 75. Кількісне визначення вмісту дельта-аминолевулиновой кислоти в сечі
Реактиви. Оцтова кислота льодяна; хлорне кислота 57%; натрію ацетат 3-х водний; дельта-амінолевулінова кислота гідрохлорид; вугілля активоване з дисперсністю 0,25-1 мм; ацетил-ацетон; п-диметиламінобензальдегідом; ацетатний буфер рН 3,6 *; суспензія вугілля *; реактив Ерліха *; беззольні фільтри (синя стрічка), калібрувальний розчин *.
Обладнання. Штатив з пробірками, піпетки місткістю 0, 1, 2,0 і 10 мл, пробірки з притертими пробками; спектрофотометр. p align="justify"> Матеріал. Сеча. Зберігається в холодильнику, рН сечі повинен бути рівний 6,0, для чого додають на 10 мл сечі 0,1 мл крижаної оцтової кислоти. p align="justify"> Метод заснований на здатності дельта-аминолевулиновой кислоти взаємодіяти з п-диметиламінобензальдегідом після видалення порфобилиногена та інших заважають визначенням речовин за допомогою активованого вугілля. Інтенсивність забарвлення пропорційна концентрації даної кислоти в пробі. p align="justify"> Хід визначення. До 1 мл сечі у пробірці з притертою пробкою додають 9 мл суспензії активованого вугілля в ацетатному буфері рН 3,6. Суспензію збовтують 1 хвилину і фільтрують через паперовий фільтр. У дві пробірки (контрольну і дослідну) відбирають по 2 мл фільтрату. В дослідну пробу додають 0,05 мл Ацетилацетон, в контрольну - така ж кількість ацетатного буфера. Вміст обох пробірок ретельно перемішують скляною паличкою. Потім пробірки поміщають на 20 хвилин у киплячу водяну баню, охолоджують, доводять об'єм рідини ацетатним буфером до 2 мл і в кожну пробірку додають по 2 мл реактиву Ерліха, перемішують. Через 15 хвилин спектрофотометріруют дослідну пробу проти контрольної при довжині хвилі 553 нм в кюветі з товщиною шару 1 см. Забарвлення розчину стабільна протягом години. p align="justify"> Розрахунок. Зміст дельта-аминолевулиновой кислоти проводять за калібрувальним графіком, умови побудови якого представлені в таблиці. br/>
№ № пробіркіРабочій калібрувальний розчин, млАцетатний буфер рН 3,6, млАЛК в пробі (2
З кожної проби відбирають по 2 мл розчину в дві пробірки (контрольну і дослідну), які обробляють як зазначено вище. За отриманими даними будують калібрувальний графік. p align="justify"> Розрахунок. При розрахунку рекомендується проводити перерахунок на 1 г креатиніну, тому що діурез за добу може бути різним.
Зміст АЛК в сечі розраховують ...
