и, бронхіальна астма, абсцес легенів, пневмонія, гангрена легенів).
Крім того, мати-й-мачуху застосовують у вигляді водних витягів при гастритах, виразковій хворобі шлунка і дванадцятипалої кишки, захворюваннях печінки [Aniszewski, 2007].
РОЗДІЛ 2. ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНА ЧАСТИНА
. 1 Матеріали та методи
. 1.1 Рослинний матеріал
У роботі використані алкалоїди, водний екстракт лікарської рослини чистотілу великого (Ch. majus L.), водний екстракт цикорію звичайного (C. intybus L.), водний екстракт мати-й-мачухи звичайної (T. farfaraL.).
Зразки водного екстракту з чистотілу великого, цикорію звичайного, мати-й-мачухи звичайної були отримані таким способом: подрібнену суху траву чистотілу великого (2,5г) заливали дистильованою киплячою водою (50 мл/л) і кип'ятили протягом 15 хв. Отриманий екстракт фільтрували через 4-6 шарів марлі, далі пропускали через мембранний фільтр Synpor з діаметром пір 0,2 мкм. Стерильний екстракт розливали в пробірки Еппендорф і зберігали при температурі - 20 ° C.?
Перед дослідженням соки рослин розводили стерильною дистильованою водою до концентрації l: 10, 1: 100, 1: 1000.
. 1.2 Метод виділення алкалоїдів чистотілу великого
Алкалоїди чистотілу великого виділяли в лабораторії алкалоїдів Ташкентського інституту хімії рослинних речовин ім. академіка С.Ю. Юнусова на підставі методів, описаних А.П. Горіховим (1955).
Зразки алкалоїдів з чистотілу великого (Ch. majus L.) були отримані таким способом: чистотіл (235 г) подрібнили в ступці. До отриманої маси додали 5% соляну кислоту, після 1-годинного витримування заливали 1,5л аміаку на 2 ч. Після цього додавали хлороформ таким чином, щоб домогтися повної екстракції речовин з сировини. Екстракцію рослини чистотілу поміщали в апарат Сокслета, який в нашому випадку використовувався як циркуляційний апарат. Він прискорює екстрагування, виконуючи її в один етап. На виході отримали екстракт, в який додали 5% сірчану кислоту (H2SO4). У паровій перегонці кислоту змивали бензином для того, щоб очистити від масел. На виході отримали кислоту без маслених домішок. Після додається концентрований аміак, що б отримати луг. До лугу додали хлороформ і отримали хлор - екстракт. Загальна вага суми алкалоїдів дорівнював 1,3 г, що становить 0,55% від сухої ваги лікарської сировини.
Хроматограмма проводилася на пластинах Silufol UV - 254 в системі розчинників ТМА (толуол/метанол/25% аміак - 4: 1: 0.04) [Волощук, 2010].
. 1.3 Бактеріальні тест - системи для визначення токсичних ефектів з'єднань природного походження
У роботі використовували штам Salmonella typhimurium:
ТА 100 (his G46, rfa, uvr -, pKm 101, bio -), отриманий з колекції мікроорганізмів каф.генетікі МГУ (м.Москва).
Проведення експерименту:
. За 12-15ч. до проведення експерименту роблять пересівши культури Тестерна штаму з косяка в 5мл LB-бульйону для отримання нічний культури.
. 2% LB-агар розливають в чашки Петрі.
. Роблять розведення нічний культури в ізотонічсеком 0,9% розчині NaCl.
. Розтоплений 0.6% LB-агар розливали стерильно по 3мл в пробірки і ставили у водяну баню при 45 ° С.
. У пробірки з 3мл напіврідкого 0.6% LB-агар вносили 0.1мл бактеріальної суспензії потрібного розведення і 0.1мл речовини в досліджуваній?? онцентрації. Розчин перемішували і нашаровуються на нижній 2% поживний агар в чашки Петрі. У негативний контроль замість речовини додавали 0.1мл розчинника. Після 24г. інкубації при 37 ° С підраховують число колоній в досвіді і контролі і обчислюють відсоток виживання або ступінь токсичності речовини:
число колоній в досвіді
Відсоток виживання=--------------------------------- х 100%
число колоній в контролі
Досвід проводять у 2 - 3-х повторностях. Якщо відсоток виживання штаму становить менше 3%, досліджувати дану концентрацію в дослідах на мутагенність не слід.
Необхідні середовища:
- LB-бульйон: Пептон - 10 г, Дріжджовий екстракт - 5 г, NaCl - 5 г.
2-2% LB-агар Пептон - 10 г, Дріжджовий екстракт - 5 г, NaCl - 5 г, агар - 8 г.
- 0,6% LB-агар.
. 1.4 Бактеріальні тест - системи для визначення мутагенних ефектів з'єднань природного походження
Сутність тесту полягає в тому, що Тестерна штами бактерій Salmonella typhimurium к...
