атися 15 хв при температурі 120 градусів.
Жовточно-сольовий агар (ЖСА) - дана середу використовується для виявлення стафілококів. Готували наступним чином: розплавляли 1 л МПА, розчиняли в ньому 95г хлориду натрію (NaCl), охолоджували до 45-50 градусів, додавали 20% желточной суспензії (асептичний витягнутий з яйця жовток збовтували з 200 мл ізотонічного розчину хлориду натрію). Агар ретельно змішували з желточной суспензією, розливали по 20 мл в чашки Петрі.
Кров'яний агар - універсальна живильне середовище для різних мікроорганізмів, основою якої є сухий поживний агар. Готували наступним чином: готували 2% агару (pH 7,4-7,6), до розплавленого й охолодженого до 45 градусів агару, дотримуючись правил асептики, додавали 5% живильне середовище (Дефібриновану баранячу, кінську або кролячу кров; цитратную або Дефібриновану кров людини без антибактеріальних препаратів). Суміш ретельно перемішували, не допускаючи утворення піни, розливали у стерильні чашки Петрі, попередньо підігріті в термостаті, шаром 3-4 мм. Середу зберігають не більше двох тижнів у целофанових мішках при температурі 4-6 градусів.
Крім вище перерахованих середовищ для ідентифікації різних груп мікроорганізмів застосовувалися такі середовища:
Середа Хью-Лейфсона (ідентифікація стафілококів, псевдомонад). К1 л дистильованої води додавали 2 г пептона, 5 г хлориду натрію (NaCl), 3 г агар-агару; підігрівали суміш до розчинення інгредієнтів, подщелачивать 20% розчином гідроксиду натрію (NaOH) до pH 7,4-7,5, доводили об'єм середовища до початкового і додавали 3 мл 1% водного розчину бромтимолового синього; стерилізували при 0,5 атм. 20 хв.
Середа Олькеницького (ідентифікація бактерій родини Enterobacteriaceae): до 100 мл дистильованої води додавали 2,5 г сухого поживного агару, 1 г лактози, 1 г сахарози, 0,1 г глюкози, 1 г сечовини, 0 , 02 г солі Мора, 0,03 г тіосульфату натрію, 0,04 мл 0,4% водного розчину фенолового червоного; все ретельно перемішували, встановлювали pH 7,2-7,4, розливали по пробірках, стерилізували текучою парою по 20 хв 3 дні поспіль; потім середу скошували, залишаючи стовпчик висотою 5 см.
Середа Кларка, середа Сіммонса - живильні середовища для вивчення ферментації полісахаридів бактеріями родини Enterobacteriaceae. Готували з готових сухих сумішей згідно прописами на упаковках 9 (виробник - НВО «Живильні середовища», м Махачкала, Росія).
Середа Кінг (ідентифікація псевдомонад) - суха комерційна середу (виробник - НІІМП, г. Ростов-на-Дону, Росія).
середу для визначення фосфатази (використовується при ідентифікації бактерій роду Staphylococcus). Готували з готової сухої суміші згідно прописами на упаковці (виробник - НВО «Живильні середовища», м Махачкала, Росія).
. 3 Виділення збудників з об'єктів зовнішнього середовища
Взяття досліджуваного матеріалу з поверхні різних об'єктів вели методом змивів за допомогою стерильного ватного тампона на паличці або марлевою серветкою. При контролі предметів з великою поверхнею змиви проводили в декількох місцях досліджуваного предмета. Відібрані проби засівали на чашки Петрі з ЖСА, 0,5 мл змивний рідини засівали 5 мл бульйону з 6,5% хлоридом натрію для виділення S.aureus. Потім інкубували при температурі 37 градусів 18-24 години. При наявності підозрілих колоній готували мазки, фарбували і микроскопировать.
2.4 Методи ідентифікації мікроорганізмів
. 4.1 Ідентифікація бактерій роду Staphylococcus
Метою первинної ідентифікації є встановлення приналежності виділеної культури до сімейства Micrococcaceae і роду Staphylococcus. Для стафілококів характерні золотисті або білі колонії. Переважна більшість штамів золотистого стафілокока ідеякі штами S.epidermidis на кров'яний середовищі утворюють прозору зону гемолізу. У мазках розташовуються поодинці, парами або у вигляді скупчень. Для ідентифікації даного роду використовувалися наступні тести:
а) Визначення ферментації глюкози в анаеробних умовах. Добову агарове культуру досліджуваного штаму сіяли в стовпчик середовища Хью-Лейфсона уколом до дна пробірки, а потім на поверхню агару наливали 1,5 мл стерильного вазелінового масла. Посів інкубували при 37 градусах. Реакція вважається позитивною, якщо відбувається жовте забарвлення стовпчика середовища.
б) Визначення лецитинази. Для виділення лецитинази посіви інкубували на ЖСА протягом 18-24 годин, а потім ще 18-24 години. Про наявність лецитинази свідчить райдужний віночок навколо колоній.
Визначення ферментації маніту в анаеробних умовах. Визначення проводили аналогічно визначенню ферментації глюкози в анаеробних умовах.
