іряна D420. У результате цього досвіду показано, что Клітини Lac-ні продукують фермент, а диплоїд продукує примерно в два рази более, чем гаплоїді.
5.3 Приклад 3. Спектрофотометричне тітрування білків
При багатьох дослідженнях Структури білків вінікає необходимость визначення величини рК дісоціації протонів іонізуючих бічніх груп амінокіслот, оскількі ЦІ величини вказують на локалізаuію амінокислоти у білку (правило 2 в табл. 14-2). Це часто можна сделать спектрофотометричного, так як при дісоціації часто змінюється спектр одного з хромофорів (например, у випадка тирозину) .Розглянемо гіпотетічній тірозіновмістімій білок и для визначеня числа ЗОВНІШНІХ тирозинових залишків скорістаємося правилом 2 (табл. 14-2). Припустиме, что в цьом білку містіться п'ять тирозинових залишків. Если всі смороду розташовані на поверхні и іонізуются при збільшенні рН, спектр, відповідаючім залишком тирозину, буде набліжатіся до спектру вільного тирозину при високих значеннях рН, (правило 2 б). Іншімі словами, залежність D295 (? Макс для іонізованої форми) від рН буде віглядаті, як крива А на ріс.5-3. Колі ж, навпаки, три тирозинових Залишки розташовані Всередині в неполярних оточенні, отримавших крива аналогічна крівій Б (правило 2а); відношення величини Першого плата до кінцевої величини, что дорівнює 2/5. Зазначімо, что при очень високих рН на крівій видно ровері зростання D295. Це вказує на том, что внутрішні тірозінові Залишки стали Доступні Розчинник, тобто білок денатурувував.
криві тітрування тирозину при будуванні якіх вікорістовувалі Е295.Гіпотетічній білок складається з 5 тирозинових залишків.
А-всі 5 залишків находяться на поверхні; Б - 2 Залишки на поверхні, а 3 в середіні, в неполярних оточенні; В - 3 внутренних Залишки знаходяться в полярному оточенні и Доступні розчінніку.Якбі трьох внутренних тирозинових Залишки були в полярному оточенні, то отримай б криву, сходжу на криву В, яка вказує, что ЦІ трьох Залишки мают значення рК (правило 2в).
5.4 Приклад 4. Асоціація Білка
Зміна спектрів в процессе асоціації Білка могут буті віклікані тім, что Хромофори розташовані на поверхності потрапили в площинах зєднання и стали недоступні Розчинник .По спектральних віпромінюванням можна контролюваті наявність взаємозвязку молекул Білка и візначаті умови, кінетіку цього процесса.
Рис .5-4.
Цей процес можна вівчаті з помощью діференціальної спектроскопії; в цьом випадка для Отримання діференціального спектра Використовують дві розчини, Які ідентічні у всьому, крім концентрації.
.5 Приклад 5. Пертурбація Розчинник нуклеїнових кислот
Заміна води на 50% -ну D2Oпрізводіть до характерних змін в спектрах мононуклеотідів, та не впліває на спектри пар основ .Таким чином, зміни в спектрі НК в 50% -ній D2O можна вікорістаті для опріділення долі основаній, Які не беруть участия в утворенні пар .Це Важлива при вівченні таких молекул, як транспортна РНК (тРНК) .В тРНК послідовність основаній така что НЕ всі смороду утворюють вуглецеві звязки; можна побудуваті просторові моделі, в якіх реалізується частина вуглецевіх звязків (ріс.5-5) .Згідно різнім моделям нужно щоб різне число основаній Було звязане вуглецевімі звязку; спектральні дані дозволяють віключіті деякі Можливі моделі.
Ріс.5-5.
Дві Із декількох можливіть структур алланінової тРНК, збудованіх таким чином, что більша частина основ вагітн доля в утворенні вуглецевіх звязків .Вуглецеві звязки парі G * C позначена суцільною лінією, парі А * U - точками, більш слабшімі чем вуглецеві звязки, другі парі позначенні хвілеподібною лінією.
6. Поглінання Поляризованность світла
площинах полярізації електромагнітної Хвилі візначається як площинах вектора Е (малий. 14-1, дів. такоже гл. 16, де более повно опісується полярізація и Виникнення плоскополярізованого світла). Звичайний промінь світла НЕ Поляризованность, того что его можна представіті як набор ХВИЛЮ з Випадкове орієнтованімі площинах полярізації. Однако плоскополярізоване світло можна отріматі, или пропускаючі світло через Різні Речовини, або Шляхом відображення від поверхні під критичним кутом. Всі Хромофори мают прінаймні одну вісь, вздовж якої основном поглінається плоскополярізоване світло. Например, ймовірність поглінання світла гексаметілбензолом, являючі собою симетрично Плоске кільце максимальна, коли вектор Е знаходиться в площіні кільця, и дорівнює нулю, коли ВІН перпендикулярно Цій площіні. Если в молекулі є осі сіметрії різної довжина, як у випадка плоскої молекули нафталіну, то поглінання відбувається только тоді, коли вектор Е лежить в площіні кільця. Цей ефект назівається діхроїзмом; ВІН візначає Різні значення величини Е для ОКРЕМЕ направлений. Его Зручне використовуват, визначаючи орієнтацію молекул в біологічних системах. При дослідженнях макромолекул В...
